膜联蛋白A2在小鼠视网膜新生血管形成过程中的表达及作用机制  

The expression and function of annexin A2 in the course of retinal angi0genesis of mouse

作　　者：王猛[1,2] 杨侠[1] 董晓光[1] 

机构地区：[1]山东省医学科学院山东省眼科研究所山东省眼科学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地,青岛266071 [2]临沂市人民医院眼科

出　　处：《中华眼科杂志》2013年第7期642-648,共7页Chinese Journal of Ophthalmology

基　　金：山东省自然科学基金（ZR2011HM012）

摘　　要：目的探讨膜联蛋白A2（ANXA2）在小鼠视网膜新生血管形成过程中的表达及作用机制。方法实验研究。将C57BL/6J小鼠分为4组：正常组（80只）、氧诱导视网膜病变（OIR）空白对照组（80只）、OIR阴性干扰组（50只）和OIR阳性干扰组（50只）。采用视网膜铺片法对比观察氧诱导视网膜新生血管形态学变化。实时荧光（real-time）PCR法检测正常组和OIR空白对照组12-30日龄小鼠视网膜组织中ANXA2mRNA的表达变化。取4组中17日龄小鼠视网膜行视网膜铺片。应用real-timePCR法及免疫印迹法检测4组17日龄小鼠视网膜组织中ANXA2、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9和组织金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）的mRNA和蛋白表达情况。应用单因素方差分析对4组结果进行比较，进一步的两两比较采用SNK-q检验。结果4组17日龄小鼠视网膜铺片结果发现，与正常组相比，OIR空白对照组视网膜新生血管迂曲、扩张，分布紊乱，渗漏严重，血管分层不清，大量异常交通支。ANXA2基因干扰后，OIR阳性干扰组视网膜新生血管迂曲现象减轻，血管渗漏较少，微血管瘤及新生血管芽数量减少，视网膜层次较明显，新生血管的危害减轻。不同日龄小鼠视网膜中ANXA2基因表达水平与新生血管生长密切相关，呈现出视网膜血管发育旺盛期高表达，而血管发育停滞期低表达的趋势。real-timePCR法检测结果显示，4组小鼠视网膜中ANXA2、VEGF-OL、MMP-2、MMP-9和TIMP-2的mRNA表达水平的差异均有统计学意义（F=8．122-74．009，P值均〈0．05）。进一步两两比较结果显示，OIR空白对照组的VEGF-α（0．22±0．04）、MMP-2（11．08±1．28）、MMP-9（4．64±0．38）的基因表达水平较正常组（0．16±0．02、2．18±1．39、1．17±0．25）显著上调（SNK-q检验：P值均〈0．01），而OIR阳性干扰组的VEGF-α（0．02±0．01）、MMPObjective To study the production and the role of annexin A2 （ANXA2） in the process of retinal neovascularization of mouse. Methods Experimental study. C57BL/6J mice were classified into four groups ： normal group （ 80 mice ） , oxygen induced retinopathy （ OIR ） mock group （ 80 mice ） , siANXA2 group （ transfected with siRNA target ANXA2） （ 50 mice） , and siANXA2_M group （ 50 mice）. Stretched preparation of retina after angiography was used to observe the morphology change of retinal neovascularization from 12 to 30 days after birth in normal group and OIR mock group, and real-time PCRwas used to test the expression of ANXA2 in these days. On 17 days old,the mRNA and protein production of vascular endothelial growth factor （VEGF） -α, matrix metalloproteinase （ MMP ） -2, MMP-9, and tissue inhibitor of metalloproteinase （TIMP） -2 in 4 groups were assessed by real-time PCR and Western blot. The results of all factors among four groups were analyzed by one way ANOVA and SNK-q test. Results The retinal neovascularization of siANXA2 group in 17 days old was more regular than that in OIR mock group. The production of ANXA2 in mouse retina was associated with the stage of retinal neovascularization. The expression of ANXA2 was in high level when neovessels grew and in low level when neovessels stopped growing. The mRNA expressions of ANXA2, VEGF-α, MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 showed statistical difference among 4 groups （ F = 8. 122-74. 009, P 〈 0. 05 ）. Significant statistics difference was found in multiple comparison ： the expressions of VEGF-α （ 0. 22 ± 0. 04 ）, MMP-2 （ 11.08 ± 1.28 ）, MMP-9 （ 4. 64 ± 0. 38） in OIR mock group were significantly higher than that in normal group（0. 16±0. 02,2. 18 ± 1.39, 1.17 ±0.25） （SNK-q test： P 〈0.01）. In siANXA2 group,the productions of VEGF-α （0. 02 ±0.01） , MMP-2（2.21 ±0. 42） , MMP-9 （1.33 ± 0. 10） were significantly lower than that in OIR mock group（ SNK-q test：P 〈0. 01 ）. The

关 键 词：视网膜新生血管化 膜联蛋白A2 血管内皮生长因子A 基质金属蛋白酶类 

分 类 号：R774.1[医药卫生—眼科]