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机构地区:[1]江苏省如东县中医院检验科,如东226440 [2]南通市第三人民医院检验科
出 处:《南通大学学报(医学版)》2013年第4期261-263,共3页Journal of Nantong University(Medical sciences)
基 金:南通市卫生局资助项目(W201217)
摘 要:目的:从慢性乙型肝炎恩替卡韦临床耐药的患者血清中,应用高保真聚合酶长距离扩增、克隆乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)全基因组序列,建立HBV恩替卡韦耐药株的全长基因克隆。方法:从3例恩替卡韦临床耐药的慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,应用高保真聚合酶对3 200 bp的HBV DNA进行全序列扩增,通过克隆技术构建PGEM-HBV重组质粒,DNA测序后进行序列分析。结果:获得1株恩替卡韦基因耐药的HBV DNA全长序列克隆,序列长度为3 216 bp,序列分析发现在逆转录区有L180M、M204V、T184G位点变异。结论:构建了恩替卡韦基因耐药的HBV DNA全长序列克隆,为进一步研究HBV耐药株提供工具。Objective: Long-distant polymerase chain reaction(PCR) technique with high-fidelity enzyme was used to amplify the complete genome of hepatitis B virus(HBV) from an entecavir resistant patient and establish a complete sequence of HBV from an entecavir resistant patient.Methods: HBV DNA in serum was extracted from an entecavir resistant patient and PCR was performed for complete genome amplification.After cloning into T-easy vector and sequencing,the complete sequence was analyzed.Results: The complete sequence was composed 3 261 bp.The patterns of mutation are rtL180M+rt M204V+T184G.Conclusion: We have established a complete sequence of HBV from an entecavir resistant patient.
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