Gab2对人肺癌细胞A549侵袭能力影响及其机制的探讨  

Role and mechanism of Gab2 in invasion of human lung cancer A549 cells

作　　者：史立宏[1,2] 陶蓉[3] 王云甲[3] 张秀荣[1] 孙秀宁[4] 周风华[5] 罗荣城[2] 张宝刚[5] 

机构地区：[1]潍坊医学院山东省应用药理学重点实验室,山东潍坊261053 [2]南方医科大学南方医院肿瘤中心,广东广州510515 [3]潍坊医学院呼吸病学,呼吸病学硕士研究生山东潍坊261053 [4]潍坊医学院病原微生物学教研室,山东潍坊261053 [5]潍坊医学院病理学教研室,山东潍坊261053

出　　处：《中华肿瘤防治杂志》2013年第16期1207-1211,共5页Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment

基　　金：国家自然科学基金(81072068);山东省中青年科学家科研奖励基金〔(博士基金)2010BSB14050〕;山东省教育厅高等学校优秀青年教师国内访问项目(2009);潍坊市科学技术发展计划(201201230)

摘　　要：目的:探讨Grb2协同结合蛋白2(Grb2binding protein-2,Gab2)对人肺癌A549细胞体外迁移和侵袭的影响及其机制。方法:将质粒pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-Gab2#1、pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-Gab2#2和对照空载质粒转染到A549细胞中,建立Gab2低表达的siGab2/A549#1、siGab2/A549#2细胞和对照SCR/A549细胞。应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测小分子干扰RNA(siRNA)干扰Gab2表达后的基因和蛋白表达水平。趋化运动实验检测细胞的迁移能力;体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力;蛋白质印迹法检测siRNA干扰Gab2表达后,A549细胞在胰岛素样生长因子-1(insulinlike growth factor-1,IGF-1)刺激下基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metal-loproteinase-9,MMP-9)的表达及磷酸化Akt(pAkt)、磷酸化人雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamy-cin,pmTOR)的活化情况。结果:siRNA干扰Gab2表达后,RT-PCR测定A549细胞Gab2mRNA相对表达量为1.340±0.009,Scr/A549细胞为1.201±0.074,siGab2#1/A549细胞为0.315±0.008,siGab2#2/A549细胞为0.289±0.007。蛋白印迹法检测A549细胞Gab2蛋白表达量为0.205±0.003,Scr/A549细胞为0.241±0.004,siGab2#1/A549细胞为0.128±0.002,siGab2#2/A549细胞为0.066±0.001。siGab2#2/A549细胞与A549细胞比较Gab2基因表达显著降低,t=168.032,P<0.001;Gab2蛋白表达也显著降低,t=64.352,P<0.001。siGab2#2/A549细胞的体外迁移和侵袭能力明显低于SCR/A549细胞,t值分别为5.101和10.812,P值分别为0.029和0.002。在IGF-1刺激下,siGab2/A549细胞的MMP-2、MMP-9蛋白的表达量不再有明显变化,t值分别为-2.051和-2.652,P值分别为0.054和0.064。siGab2/A549细胞中pAkt、pmTOR的活化也显著抑制。结论:Gab2可能通过调节Akt/mTOR信号通路,促进A549细胞的侵袭能力。OBJECTIVE： To investigate the effect and the molecular mechanism of Gab2 on migration and invasion of human lung adenocarcinoma cell line A549. METHODS： The plasmid pGCsilencerU6/GFP/Neo RNAi-Gab2 35 1, pGCsi- lencerU6/GFP/Neo-RNAi-Gab2 35 2 and the empty vector were transfected into A549 cells respectively to establish Gab2-deficient A549 cells （siGab2/A549 35 1, siGab2/A549 ~ 2 cells） and the SCR/A549 cells （as the control cells）. RT-PCR and Western blot analyse were used to test the mRNA and protein expression levels of Gab2. The abilities of mi- gration and invasion were determined by chemotaxis assay and invasion assay. The IGF-1 induced expression of MMP-2, MMP-9 and the activation of pAkt,and pmTOR in Gab2-deficient A549 cells and SCR/A549 cells were detected by West- ern blot. The Gab2 mRNA expression of A549 cell, Scr/A549 cell, siGab2 # 1/A549 cell and siGab2 ~ 2/A549 cell were

关 键 词：Gab2 肺肿瘤 A549细胞 侵袭 

分 类 号：R734.2[医药卫生—肿瘤]