多肽酰肼连接法合成C端香豆素修饰的泛素  

Chemical synthesis of Ub-AMC via ligation of peptide hydrazides

作　　者：梁军[1,2,3,4] 方葛敏[1,2] 黄修良[5,6,7] 梅子青[5,6,7,3,4] 李娟[3,4] 田长麟[1,2] 刘磊[3,4] 

机构地区：[1]中国科学院强磁场科学中心 [2]中国科学技术大学,合肥230026 [3]清华大学-北京大学生命联合中心 [4]清华大学化学系,北京100084 [5]蛋白质科学教育部重点实验室 [6]清华大学结构生物学中心 [7]清华大学生命科学学院,北京100084

出　　处：《中国科学：化学》2013年第8期1051-1058,共8页SCIENTIA SINICA Chimica

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973计划)(2013CB932800);国家自然科学基金(31100524,31170817,20972148)支持

摘　　要：C端用香豆素修饰的泛素分子(Ub-AMC)是研究蛋白质泛素化过程的重要探针.该探针分子的制备目前主要依靠生物表达结合化学修饰的方法,合成效率较低.本文使用多肽酰肼连接反应,发展出化学全合成Ub-AMC分子的新路线.该方法通过N到C顺序两次连接实现了目标分子的组装,再通过自由基脱硫反应得到天然结构的Ub-AMC分子,有望实现较大量的合成.通过酶学活性实验,证实了通过新方法合成的Ub-AMC具有预期的生物活性.The C-terminal conjugate of ubiquitin with 7-amino-4-methylcoumarin （Ub-AMC） is an important probe for fluorescence-based analysis of deubiquitinating enzyme （DUB） activity. It is important to develop more efficient methods for the preparation of Ub-AMC because the currently available technology is still expensive for scaled-up production. In the present work, we report an efficient strategy for total chemical synthesis of Ub-AMC through ligation of peptide hydrazides. Three peptide segments are assembled via N-to-C sequential ligation and the resulting product is converted to Ub-AMC via TCEP-mediated desulfurization. The synthetic Ub-AMC is shown to have expected biological functions through the measurement of the DUB activity.

关 键 词：酰肼连接反应 多片段连接 去泛素化酶 泛素 

分 类 号：O629.7[理学—有机化学]