CXCR4基因shRNA表达质粒的构建及筛选鉴定  

作　　者：胡志洪[1] 王晓婓[2] 国春龙 宋新灵[2] 

机构地区：[1]白城中心医院,吉林白城137000 [2]吉林大学第二医院 [3]吉林省申邦细胞工程研究所

出　　处：《中国老年学杂志》2013年第17期4192-4194,共3页Chinese Journal of Gerontology

基　　金：吉林省自然科学基金(No.201015175)

摘　　要：目的构建编码CXCR4 mRNA的短发卡样RNA(shRNA)表达质粒用以筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法根据GenBank中登录的CXCR4基因的核苷酸序列,应用shRNA设计软件设计并合成4条短发卡shRNA的oligo DNA,构建shRNA重组质粒。采用酶切电泳和测序方法进行鉴定。将鉴定后的CXCR4基因shRNA重组质粒经脂质体介导转染胶质瘤U251细胞,24 h后经RT-PCR筛选有效的shRNA重组质粒。结果构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出目的条带,DNA测序结果与理论序列完全一致。RT-PCR检测显示,转染pGPU6/GFP/Rac1-421的U251细胞CXCR4基因mRNA的转录水平下降。结论成功构建CXCR4基因shRNA表达质粒,并筛选出效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pGPU6/GFP/Rac1-421。

关 键 词：CXC趋化因子受体4 RNA干扰 U251细胞 

分 类 号：R739.4[医药卫生—肿瘤]