沉默信息调节因子1活性受抑导致肝细胞糖代谢紊乱促进丙型肝炎病毒复制  

Inhibition of silent information regulator 1 induces glucose metabolism disorders of hepatocytes and enhances hepatitis C virus replication

作　　者：孙丽杰[1] 赵勇华[1] 李树臣[1] 于建武[1] 康鹏[1] 刘伟 

机构地区：[1]哈尔滨医科大学附属第二医院感染病科,150086 [2]科研实验中心

出　　处：《中华传染病杂志》2013年第10期577-584,共8页Chinese Journal of Infectious Diseases

基　　金：黑龙江省教育厅科学研究项目（12531292）;国家自然科学基金资助项目（81370541）

摘　　要：目的利用携带HcV复制子的Huh7．5细胞探讨HCV复制对沉默信息调节因子1（SIRTl）表达和肝细胞葡萄糖代谢的影响。方法应用流式细胞仪、比色法测定细胞活性氧（ROs）变化和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）＋／还原型NDA（NADH）比值变化，应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western印迹法检测SIRTl活性、mRNA和蛋白的表达，应用放射核素法和葡萄糖氧化酶法测定肝细胞葡萄糖摄取率和糖异生，RT-PCR检测SIRTl下游调节糖代谢基因mRNA水平。计量资料比较采用t检验。结果与Huh7．5细胞相比，复制子细胞ROS水平升高（3．8±0．5比1．0±0．2，t=12．736，P〈0．01），NAD＋／NADH比值下降（0．03±0．01比0．12±0．03，t=6．971，P〈0．01），SIRTl活性（0．3±0．1比1．0±0．2，t=7．668，P〈0．01）、mRNA（0．4±0．1比1．0±0．3，t=4．648，P〈0．01）和蛋白（0．3±0．1比0．8±0．2，t=5．941，P〈0．01）水平下降。SIRT1受抑后，不仅增加胰岛素受体底物-1（IRS-1）磷酸化（0．7±0．2比0．4±0．1，t=3．286，P〈0．01），降低蛋白激酶B（Akt）磷酸化（0．3±0．1比0．6±0．2，t=3．286，P〈0．01），下调葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）基因表达（0．4±0．1比1．0±0．2，t=6．573，P〈0．01），抑制葡萄糖摄取率（每分钟计数值：4600±500比21000±4600，t=8．682，P〈0．01）；而且降低叉头蛋白转录因子01（Fox01）磷酸化（0.2±0．1比0．5±0．1，t=5．196，P〈0．01），上调磷酸烯醇丙酮酸羧激酶（2．8±0．6比1．0±0．3，t=6．573，P〈0．01）和葡萄糖-6-磷酸酶（2．6±0．5比1．0±0．2，t=7．278，P〈0．01）基因表达，增加糖异生（2．5±0．5比1．0±0．2，t=5．543，P〈0．01）。结论HCV复制降低NAD＋／NADH比值，下调SIRTl活性和表达，改变其下游调节糖代谢相关基因表达，降低葡萄糖摄取能力，增Objective The aim of this study was to investigate the effect of hepatitis C virus （HCV） replication on expression of silent information regulator 1 （SIRT1） and glucose metabolism of hepatoeytes using Huh 7. 5 cells harboring HCV replicon. Methods The level of reactive oxygen species （ROS）, value of nicotinamide adenine dinucleotide （NAD＋ ）/reduced form of nicotinamide adenine dinueleotide （NADH） was detected by flow cytometry and chromatometry. The activity, mRNA expression, and protein level of SIRT1 were detected by a scintillation counter, real-timefluorescence quantitative polymerase chain reaction （RT-PCR）, and Western blot, respectively. Glucose uptake by hepatocytes and gluconeogenesis were detected using radioactive isotope method and glucose oxidase method. The mRNA levels of SIRT1 downstream glucose-metabolism genes were measured by RT-PCR. Measurement date were compared by t test. Results In replicon cells, the level of ROS （3.8±0.5 vs 1.0±0.2; t=12. 736, P〈0.01） was increased and the value of NAD＋/ NADH （0. 03±0.01 vs 0. 12±0.03; t=6. 971, P〈0. 01） decreased compared with Huh 7.5 cells. The activity （0.3±0.1 vs 1.0±0.2; t=7. 668, P〈0.01）,mRNA expression（0.4±0. 1 vs 1.0±0.3; t=4. 648, P〈0.01） and protein level（0.3±0.1 vs 0.8±0.2; t=5. 941, P〈0.01） of SIRT1 were reduced. Inhibition of SIRT1 not only increased insulin receptor substrate-1 （tRS-1） phosphorylation （0.7±0.2 vs 0.4 ± 0. 1; t= 3. 286, P〈0.01）, decreased protein kinase B （Akt） phosphorylation （0.3±0.1 vs 0.6±0.2; t= 3. 286, P〈0.01）, down-regulated cell surface expression of glucose transporter 2 （GLUT2, 0. 4±0.1 vs 1.0±0.2; t=6. 573, P〈0. 01） and suppressed cellular glucose uptake （count per minute： 4600 ± 500 vs 21 000 ± 4600; t = 8. 682, P〈0.01） ; but also decreased phosphorylation of forkhead box O1 （Fox O1, 0. 2±0. 1 vs 0. 5 ±0. 1; t=5. 196, P〈0.01）, up-regulated phosphoenolpyruvate carboxykinase （PEPCK, 2.8±0.6 vs 1.0�

关 键 词：肝炎病毒属 凋亡抑制蛋白质类 基因沉默 葡萄糖代谢障碍 病毒复制 

分 类 号：R363[医药卫生—病理学]