扩增脐血来源NK细胞增强其抗血液肿瘤细胞作用的研究  

Enhanced cytotoxicity against leukemia cells of natural killer cells from cord blood after expansion in vitro

作　　者：周峰[1] 韩文敏[1] 贾祝霞[1] 杨建和[1] 肖溶[1] 马玲娣[2] 卢绪章[1] 

机构地区：[1]常州市第二人民医院血液科,213003 [2]常州市第二人民医院中心实验室,213003

出　　处：《中华血液学杂志》2013年第11期952-956,共5页Chinese Journal of Hematology

基　　金：国家自然科学基金（81101647）;常州市卫生局重大科技项目（ZD201108）;常州市卫生局青年人才项目（QN201203）;南京医科大学重大课题（2012NJMU127）

摘　　要：目的探讨利用转染膜型IL-15和4-1BB配体K562（K562-mbl5-41BBL）细胞作为滋养细胞体外扩增脐血来源自然杀伤（CB．NK）细胞，对血液肿瘤细胞杀伤能力的作用研究。方法用K562-mbl5—41BBL细胞作为滋养细胞体外增强培养CB—NK细胞，培养21d后用流式细胞仪检测扩增的CB—NK细胞表面受体的表达，用51Cr释放试验检测扩增的CB—NK细胞对血液肿瘤细胞的杀伤作用以及其免疫球蛋白样受体的配体特异性。结果培养前、后的CB—NK细胞表面抑制型受体CDl58a[（14．37±11．12）％对[16．77±11．65）％]、CDl58b[（40．92±19．02）％对（42．48±18．11）％]、NKG2A[（70．20±18．43）％对（78．90±13．69）％]的表达水平差异均无统计学意义（P值均〉O．05），活化型受体NI[p30[（4．14±2．05）％对（54．10±13．27）％]、NKp44[（0．52±1．16）％对（72．10±17．30）％]、NKp46[（44．19±6．19）％对（80．63±-14．01）％]和NKG2D[（72．25±14．35）％对（97．50±2．55）％]表达明增高，差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。扩增的CB—NK细胞对K562细胞[（55．3±4．2）％对（74．3±3．6）％]、Raji细胞[（12．0±3．6）％对（60．64-5．O）％]的杀伤作用明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。CDl58a—CDl58b—CB．NK细胞对表达不同HLAI类分子配体的靶细胞均有较高的杀伤性，CDl58a＋CDl58bCB—NK细胞对221-Cw4以及221-Cw3Cw4的杀伤性相对低，而CDl58a—CDl58b＋CB—NK细胞对221一Cw3以及221一Cw3Cw4相对低，CDl58a＋CDl58b＋CB．NK细胞仅对721—221保持较高的杀伤性。结论扩增的CB—NK细胞活化型受体的表达明显增强，而抑制型受体的表达无明显变化，其杀伤血液肿瘤细胞的能力明显增强，同时保持了NK细胞特有的免疫球蛋白受体分子的配体特异性，可为临床血液肿瘤的细胞治疗提供帮助。Objective To investigate the enhanced cytotoxicity against leukemia cells of natural killer （NK） cells from cord blood （CB） after expansion in vitro. Methods NK cells was expanded on a layer of trophoblast cells with irradiated K562-mblS-41BBL cell line for 21 days. The levels of receptors on NK cells were detected by flow cytometry. Cytotoxicity of expanded NK cells against leukemia cells and specific ligand of immunoglobulin like （Ig-like） receptors were assessed using 5~Cr released assay. Results There were no differences of inhibitory receptors expression between fresh NK cells and expanded NK cells [CD158a： （16.77±11.65）% vs （14.37±11.12）%, P〉0.05; CD158b： （42.48±18.11）% vs （40.92±19.02）%, P〉0.05; NKG2A： （70.20±18.43）% vs （78.90±13.69）%, P〉0.05], but higher activated receptors expression on expanded NK cells [NKp30：（54.10±13.27） % vs （4.14±2.05） %, P〈0.05; NKp44： （72.10± 17.30）% vs （0.52± 1.16）%, P〈0.05; NKp46： （80.63± 14.01）% vs （44.19±6.19）%, P〈0.05; NKG2D： （97.50±2.55）% vs （72.25±14.35）%, P〈0.05]. Expanded NK cells showed higher cytotoxicity against leukemia cell lines than fresh NK cells [K562： （74.3±3.6）% vs （55.3±4.2）%, P〈0.05; Raji： （60.6±5.0）% vs （12.0±3.6）%, P〈0.05]. CD158a-CD158b NK cells had higher cytotoxicity on four types of target cells, but CD 158a＋CD 158b-CB-NK cell had lower cytotoxicity on 221-Cw4 and 221-Cw3Cw4 cells. CD158a CD158b＋CB-NK cells had lower cytotoxicity on 221-Cw3 and 221-Cw3Cw4, but CD158a＋ CD 158b ＋ CB- NK cells had higher cytotoxicity on 721- 221 cells. Conclusion Expression of activated receptors of expanded NK cells were up-regulated, hut no changes of inhibitory receptors. Expanded NK cells showed high cytotoxicity against leukemia cells and kept the specificity of ligand of Ig-like receptors, which could be beneficial to cell-therapy for tumor.

关 键 词：胎血 自然杀伤细胞 血液肿瘤 

分 类 号：R733[医药卫生—肿瘤]