14-3-3ε蛋白磷酸化修饰的生物质谱分析  

Mass Spectrometric Analysis of Phosphorylation Modification in 14-3-3ε Protein

作　　者：李子健[1] 何鑫[2] 潘晨宇[3] 刘宁[3] 

机构地区：[1]北京大学第三医院血管医学研究所,卫生部心血管分子生物学与调节肽重点实验室,分子心血管学教育部重点实验室,心血管受体研究北京市重点实验室,北京100021 [2]吉林大学化学学院,长春130021 [3]吉林大学第二医院,长春130041

出　　处：《分析化学》2013年第11期1653-1658,共6页Chinese Journal of Analytical Chemistry

基　　金：国家重点基础研究项目(No.2011CB503903);国家自然科学基金(Nos.21175055;81270157;81070078);北京市自然科学基金(No.7102158);吉林省科技发展计划(No.20110739);吉林大学白求恩计划(No.2012210)资助

摘　　要：本研究在HEK293细胞中过表达带有6个组氨酸标签的14-3-3ε蛋白,经镍离子亲和树脂富集和凝胶电泳等生物化学方法分离并富集目标14-3-3ε蛋白。利用特异性胰蛋白酶对14-3-3ε蛋白进行胶内水解后,采用TiO2亲和层析法,对蛋白水解混合物中的磷酸化修饰肽段进行富集,并利用生物质谱技术分析鉴定了14-3-3ε蛋白中的磷酸化修饰位点。结果表明,利用生物质谱技术,结合人工解谱的方法,能够高效、准确地鉴定HEK293细胞中过表达的14-3-3ε蛋白中的磷酸化修饰肽段的结构信息,确定了14-3-3ε蛋白中的12个磷酸化修饰位点,其中多个位点的磷酸化修饰为首次发现。In the present study, 14-3-3ε protein was over-expressed in HEK293 cells, which was genetically attached with 6 x His tag. The protein was purified by nickel-charged hexahistidine resin as well as gel electrophoresis, and then was subject to tryptic digestion. The phosphorylated peptides within 14-3-3ε protein were enriched by TiO2 affinity chromatography, followed by mass spectrometry analysis. 12 phosphorylation sites along the primary structure of 14-3-3ε protein were identified, most of which had not been reported previously. Our results indicate that bio-mass spectrometry coupled with manual interpretation can be used to successfully identify the phosphorylation modification in 14-3-3ε protein over-expressed in HEK293 ceils.

关 键 词：质谱 14-3-3ε蛋白 磷酸化修饰 

分 类 号：O657.63[理学—分析化学]