吸烟个体血清对牙龈卟啉单胞菌内化KB细胞及KB细胞产生基质金属蛋白酶1、9和金属蛋白酶组织抑制剂1的影响  

Effect of smokers＆#39; sera on Porphyromonas gingivalis internalizing KB cells and the expression of matrix metalloproteinase-1,-9 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1

作　　者：王宏岩[1] 谭丽思[1] 刘俊超[1] 李倩[2] 潘亚萍[1] 钟鸣[3] 

机构地区：[1]中国医科大学口腔医学院牙周科·辽宁省口腔医学研究所,沈阳110002 [2]中国医科大学口腔医学院口腔生物教研室,沈阳110002 [3]中国医科大学口腔医学院中心实验室,沈阳110002

出　　处：《中华口腔医学杂志》2014年第1期15-20,共6页Chinese Journal of Stomatology

基　　金：国家自然科学基金（81271153）

摘　　要：目的探讨慢性牙周炎患者中吸烟个体血清在牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis,Pg）内化KB细胞及在内化过程中对KB细胞分泌基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinase,MMP）1、MMP-9及金属蛋白酶组织抑制剂1（tissueinhibitorofmetalloproteinase-1,TIMP-1）的作用.方法抽取20例（吸烟个体10例,非吸烟个体10例）就诊于中国医科大学口腔医学院牙周科的慢性牙周炎患者前臂静脉血5ml,离心提取血清.在试验组（吸烟组）和对照组（非吸烟组）中分别加入吸烟个体和非吸烟个体血清200、400及800μl至Pg感染KB细胞模型,作用12h,脑心浸液琼脂培养基培养细菌5～7d,计数细菌菌落.采用人酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）试剂盒检测两组上清液中MMP-1、MMP-9及TIMP-1的浓度差异.采用单因素方差分析比较两组中分别加入不同体积（200、400、800μl）血清对Pg内化KB细胞的影响及KB细胞分泌MMP-1、MMP-9、TIMP-1的差异;采用t检验比较吸烟组与非吸烟组加入相同血清量Pg内化KB细胞及KB细胞分泌MMP-1、MMP-9、TIMP-1的浓度差异.结果加入200、400、800μl血清时,吸烟组血清与非吸烟组血清引起Pg内化KB细胞的菌落数分别为（11.2±1.1）×104、（12.6±1.2）×104、（44.7±1.3）×104CFU/ml和（33.6±1.4）×104、（38.9±1.1）×104、（11.2±1.2）×104CFU/ml（P＜0.05）.在加入200、400、800μl吸烟个体血清时,KB细胞分泌MMP-1的质量浓度分别为（107.2±21.5）、（165.9±20.2）及（434.4±48.0）μg/L,分泌MMP-9的质量浓度分别为（3.99±0.29）、（4.21±0.61）及（5.62±0.47）μg/L,分泌TIMP-1的质量浓度分别为（401.3±12.7）、（418.3±28.5）及（637.3±37.3）μg/L;加入200、400、800μl非吸烟个体血清时,KB细胞分泌MMP-1的质量浓度分别为（77.6±10.8）、（84.7±10.2）及（98.2±9.7）μg/L,分泌MMP-9的质量浓度分别为（3.84±0.52）、（4.02±0.68）及（4.25±0.37）μg/Objective To investigate the effects of serum from smoking individuals or non-smoking individuals with periodontitis on Porphyromonas gingivalis（Pg） internalizing KB cells,and the expression of matrix metalloproteinase（MMP）-1,MMP-9,tissue inhibitor of metalloproteinase-1 （TIMP-1） in the culture supernatant of KB cells.Methods The venous blood of 20 periodontitis patients′（10 smoking and 10 non-smoking） was extracted under the informed consent and centrifuged for serum.The smoking-individual serum（Y group） and non-smoking-individual（N group）serum were added to the model of Pg internalizing KB cells for 12 hours,plated on brain-heart infusion（BHI） and incubated anaerobically at 37 ℃ for 5 days.The colony forming units（CFU） of cell-invasive bacteria were estimated by colony counting.M MP-1,MMP-9 and TIMP-1 protein levels in culture supernatant were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） in the two groups following co-culture of Pg with KB cells for 12 hours.Results The CFU were （11.2 ± 1.1） × 104,（12.6 ± 1.2） × 104,（44.7 ± 1.3） × 104 CFU/ml when adding 200,400,800 μl Y-group serum to the model of Pg co-culture with KB cells and when the serum was extracted from N group,the CFU were （33.6 ± 1.4） × 104,（38.9 ± 1.1） × 104,（11.2 ± 1.2） × 104 CFU/ml respectively.When 200,400,800 μl Y group-serum was added to co-culture fluid of Pg internalizing KB cells,the concentrations of MMP-1 secreted from KB cells were （107.2 ± 21.5）,（165.9 ± 20.2）,（434.4 ± 48.0） μg/L respectively,the concentrations of M MP-9 were （3.99 ±0.29）,（4.21 ± 0.61）,（5.62 ± 0.47） μg/L respectively,the concentrations of TIMP-1 were （401.3 ± 12.7）,（418.3 ± 28.5）,（637.3 ± 37.3） μg/L.When the serum （200,400,800 μl） extracted from N group,the concentration of MMP-1 and MMP-9 secreted by KB cell were （77.6±10.8）,（84.7 ± 10.2） and （98.2 ±9.7） μg/L and （3.84 ±0.52）,（4.02 ±0.68）,（4.25 ±0.37�

关 键 词：吸烟 紫单胞菌 龈 KB细胞 基质金属蛋白酶类 

分 类 号：R781.4[医药卫生—口腔医学]