转染乙酰胆碱结合蛋白基因到昆虫细胞的研究  

Research of Transfection Acetylcholine Binding Protein cDNA into Insect Cells

作　　者：林波[1] 孟海玲[1] 吴勇[1] 邴晖[1] 长孙东亭[1] 罗素兰[1] 

机构地区：[1]海南大学热带生物资源教育部重点实验室,海口市海洋药物重点实验室,中国海南海口570228

出　　处：《生命科学研究》2014年第1期1-5,38,共6页Life Science Research

基　　金：国家自然科学基金(41366002)资助项目;国家国际科技合作专项(2011DFR31210)资助项目;海南省社会发展科技专项(SF201328)资助项目;海口市重点科技计划(2013-16)资助项目;长江学者和创新团队发展计划(IRT1123)资助项目;海南省研究生创新科研课题

摘　　要：海兔(Aplysia californica)乙酰胆碱结合蛋白(Ac-AChBP)是研究烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)的结构模板之一,它的高效表达对研究神经性相关疾病具有重要的意义。高效表达关键是要有高的转染效率,通过构建含(Ac-AChBP)基因的昆虫杆状病毒表达载体Bcmid,对脂质体转染Bcmid的多个条件进行探索,研究发现,当采用对数生长中期的细胞、细胞密度为2.5×106cells/mL,质粒DNA浓度为4.5×10-2g/mL和脂质体浓度为0.8 mL/L时,转染效率达到较高值,滴度为2×107±10%pfu/mL,同时证明高滴度病毒具有高的表达效率,而且表达蛋白具有生物活性。Acetylcholine binding protein from Aplysia californica （Ac-AChBP） can provide a structural basis for understanding the structure and function of nicotinic acetylcholine receptors （nAChRs）. Its high level expres- sion is important to study neuropathic diseases, and high level expression need highly effective transfection. Bacmid containing Ac-A ChBP eDNA was constructed, and transfected insect cells through lipid. It was found to reach a high-titer （2×10^7±10% pfu/mL） at cell density of 2.5×10^6 cells/mL, recombinant Bacmid DNA con- centration 4.5×10^-6 g/mL, and lipid CellfeetinR II concentration 0.8 mL/L. It was also showed that high-titer virus had high level expression and the expressed recombinant Ac-AChBP had bioaetivity.

关 键 词：海兔乙酰胆碱结合蛋白(Ac-AChBP)基因 载体构建 脂质体转染 转染效率 表达效率 活性检测 

分 类 号：Q31[生物学—遗传学]