人载脂蛋白C Ⅱ原核表达载体构建及蛋白表达方法  

作　　者：赵莉莉[1] 汪军梅[2] 刘新宇[3] 赵郁[4] 毛用敏[1] 解用虹[4] 

机构地区：[1]天津市心血管病研究所,天津市胸科医院,天津300051 [2]山西长治医学院 [3]天津医科大学代谢病医院 [4]天津医科大学生物化学教研室

出　　处：《山东医药》2014年第1期29-31,共3页Shandong Medical Journal

摘　　要：目的构建人载脂蛋白CⅡ(ApoCⅡ)的原核表达载体,表达融合蛋白GST-hApoCⅡ。方法采用限制性内切酶BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切pUC18/hApoCⅡ获得ApoCⅡ成熟肽基因片段,并与相同酶切处理的表达载体pGEX-3X连接构建重组质粒。重组质粒经酶切鉴定、测序验证后转化感受态E.coli DH5α,IPTG诱导表达,优化表达条件,表达产物经SDS-PAGE电泳分析鉴定。选取最佳条件诱导表达,亲和层系法纯化融合蛋白,采用Western blot鉴定。结果重组质粒经酶切和测序后证实目的基因已连接入表达载体,SDS-PAGE检测到35 kD的目的蛋白条带,优化和纯化后经Western blot证实蛋白质产物为融合蛋白GST-hApoCⅡ。结论本方法成功表达融合蛋白GST-hApoCⅡ,此为ApoCⅡ结构及其作用机理研究及制备ApoCⅡ抗体等提供了便利条件。

关 键 词：载脂蛋白CⅡ 脂蛋白脂肪酶 基因工程 高甘油三酯血症 融合蛋白 

分 类 号：R318[医药卫生—生物医学工程]