PB-GF转座子系统的构建及其在真核细胞中转座的研究  

作　　者：雷占翔 刘芳芳[1] 于才勇[1] 卞干兰[1] 郭虹敏[1] 刘玲[1] 薛茜[1] 鞠躬[1] 王键[1] 

机构地区：[1]第四军医大学神经生物学教研室,陕西西安710032

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2014年第6期652-655,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金(81371364);陕西省自然科学基金重点项目(2012JZ4002)

摘　　要：目的构建能在真核细胞中发生转座的PB-GF(piggyBac gene-finder)转座子系统,作为发现和研究编码基因的工具。方法通过克隆技术,构建PB转座子载体pPB[CMV-neo]和PB转座酶表达载体pCAG-PBase,转染HeLa细胞,G418筛选和亚甲基蓝染色,验证PB转座酶在真核细胞中的转座能力。构建PB转座子载体pPB[β-Gal-pA/act-EGFP],使其包含两侧翼端加入PB转座酶识别位点反向末端重复序列(ITR),ITR1和ITR2,以及启动子陷阱和PolyA陷阱的DNA片段;同时与PB转座酶表达载体pCAG-PBase一起,构成PB-GF转座子系统。将PB-GF转座子系统转染HeLa细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测PolyA陷阱报告基因EGFP的表达;通过X-gal染色,观察启动子陷阱报告基因β-Gal的表达,明确PB-GF转座酶系统在真核细胞中的转座情况。结果成功构建成以转座子PiggyBac为基础的,含有启动子和PolyA陷阱的PB-GF转座子系统,并用该系统转染HeLa细胞24 h后观察到有相当数量的EGFP和LacZ阳性的细胞出现,转座效率高达26%。结论成功构建PB-GF转座子系统并可以在真核细胞中发生转座。

关 键 词：转座子 基因表达 基因组 

分 类 号：R394-33[医药卫生—医学遗传学] Q344.13[医药卫生—基础医学]