应用突变的断裂蛋白质内含子标记蛋白质N端  

Protein N-Terminal Labeling Using a Mutant Split-intein

作　　者：戴旭东[1,2] 李佳[1] 刘相钦[2] 孟清[1] 

机构地区：[1]东华大学生物科学与技术研究所,上海201620 [2]达尔豪斯大学生物化学与分子生物学系,Halifax,Nova Scotia B3H 4R2,Canada

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》2014年第5期508-515,共8页Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology

基　　金：加拿大国家科学与工程研究委员会基金;国家高技术研究发展计划(863计划,No.2006AA03Z451);国家自然科学基金项目(No.31070698);上海市基础研究重点项目(No.10JC1400300);教育部博士点基金项目(No.20120075110007)资助~~

摘　　要：蛋白质的特异位点修饰可以帮助了解蛋白质的结构与功能.但是,现有的蛋白质特异位点标记方法种类有限,而且存在局限性,所以有必要开发新的蛋白质特异位点标记方法.以谷胱甘肽-S-转移酶(GST)为研究对象,借助蛋白质反式剪接技术,建立了利用新型断裂蛋白质内含子对蛋白质进行N端标记的新方法.在这个方法中,通过简单的重组表达、标记和纯化得到带有荧光基团的小肽,经过蛋白质反式剪接,荧光基团被标记到蛋白质的N端.初步研究结果显示,标记效率可达到12%.Site-specific protein modification and labeling can be very helpful for protein structure and function studies. Novel methods are quite demanding due to the availability and limitation of current methods. We developed a new method for protein N-terminal labeling by employing a modified non- canonical split-intein to mediate an intein-catalyzed trans-splicing reaction between the target protein and a second protein carrying the desired labeling group. The results showed that glutathione S-transferase （GST） protein been tested was successfully site-specifically labeled at the N-terminus with fluorescein. The labeling efficiency was determined to be 12 %.

关 键 词：断裂蛋白质内含子 蛋白质剪接 N端标记 荧光基团 

分 类 号：Q71[生物学—分子生物学]