兔出血症病毒衣壳蛋白N端携带双串联卵清蛋白T细胞表位嵌合体的构建与表达  

Construction and expression of chimeric RHDV VP60 N-terminus carrying double OVA T-cell epitopes

作　　者：张燕[1,2] 王芳[2] 胡波[2] 宋艳华[2] 范志宇[2] 魏后军[2] 姜平[1] 

机构地区：[1]南京农业大学动物医学院,江苏南京210095 [2]江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014

出　　处：《畜牧与兽医》2014年第6期1-8,共8页Animal Husbandry & Veterinary Medicine

基　　金：国家自然科学基金项目(31070140);江苏省自主创新项目(CX(12)3079)

摘　　要：在兔出血症病毒(RHDV)主要结构蛋白VP60的N端插入双串联卵清蛋白(OVA)CD8+T细胞表位(OVA第257-264位氨基酸),研究外源片段对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体的可行性和对外源基因长度的耐受性。通过分子生物学方法将双串联OVA CD8+T细胞表位(257-264aa)插入至RHDV衣壳蛋白VP60基因序列的N端,得到重组VP60基因。利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白,并命名为DN。经RT-PCR、间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blot方法鉴定嵌合蛋白DN的表达,利用电镜观察嵌合蛋白病毒样颗粒的形成。结果表明嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达,且可形成与RHDV VLPs类似的病毒样颗粒。本研究为VP60作为载体系统,有效提呈外源片段的研究提供了重要依据,同时也为VLPs疫苗的研制奠定了基础。The aim of present study was to investigate whether the amino acid insertion of VP60 could affect the expression of VP60 and the ability of self-assembling into virus-like particles （VLPs）. In order to obtain the chimeric protein of VP60 carrying double ovalbumin （OVA） T-cell epitopes, the fragment of double OVA T-cell epitopes was inserted into the N-terminus of VP60. The recombinant baculovirus （ rAc -V-DN） was constructed using Bac-to-Bac baculovirus expression system. The chimeric protein named DN was expressed effectively in insect cells and confirmed by RT-PCR, IFA, SDS-PAGE and Western blot. The chimeric protein was correctly expressed and could self-assemble into VLPs by Electron microscopy analysis. This study is very valuable for enhancing the understanding of using RHDV-VLPs as a carrier for foreign genes. Meanwhile, it would be useful for the development of VLPs vaccine in future.

关 键 词：兔出血症病毒 VP60 OVA T细胞表位 病毒样颗粒 

分 类 号：S858.291[农业科学—临床兽医学]