基因突变检测PCR-SSCP实验条件优化研究  

The optimum research of PCR-SSCP technique in gene mutation detection

作　　者：张美杰[1] 李军林[1] 杨星[1] 高晓彩[1] 

机构地区：[1]西北大学生命科学学院/人口与健康研究所,陕西西安710069 [2]西北大学公共管理学院/应用心理学研究所,陕西西安710127

出　　处：《西北大学学报（自然科学版）》2014年第3期439-443,共5页Journal of Northwest University（Natural Science Edition）

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31071103,31371327);西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室开放基金资助项目(ZS11005);陕西省教育厅自然科学基金资助项目(JH11241,JH11282);西北大学研究生自主创新基金资助项目(YZZ12054)

摘　　要：探索基因突变检测PCR-SSCP技术的最佳实验条件。以人血液DNA为实验材料,人类基因组天然存在的基因突变位点为研究对象,依次对不同的变性剂、交联度、电泳缓冲液、电泳时间、电压以及有无甘油等因素进行PCR-SSCP最优条件分析。利用碱性变性剂对DNA变性,电泳条件为不加甘油的14%凝胶(交联度为29∶1),0.5×TBE电泳缓冲液、300 V电泳4 h后180 V电泳14 h,得到较理想的PCR-SSCP电泳图谱,此为摸索出的最佳条件。该条件在筛选基因突变过程中是一种简便、快速、灵敏、经济和有效的实验方法。To grope the Polymerase chain reaction-slngle strand conformation polymorphism （PCR-SSCP） technique in the process of screening gene mutation. Taking human blood DNA as experiment material and se- lecting gene mutation site which naturally existing in the human genome as the research object, groping the op- timum conditions of PCR-SSCP through different denaturants, crosslinking degree, eleetrophoresis buffer, e- lectrophoresis time, voltage and with the presence of glycerol or not. The optimum condition are as follows ： al- kaline denaturant for DNA denaturation, gel concentration of 14% without glycerol, crosslinking degree of 29： 1, eleetrophoresis buffer of 0. 5 x TBE, electrophoresis for 14 h at 180V after 4 h at 300V. The groped PCR-SSCP condition in this study is a simple, rapid, sensitive, economic and effective experimental method for screening gene mutation.

关 键 词：PCR-SSCP 基因突变 最佳条件 

分 类 号：Q987[生物学—遗传学]