tPAcDNA在兔乳腺中的表达  

作　　者：王凯[1] 杨庆章[2] 等 

机构地区：[1]上海农业科学院畜牧兽医研究所,中国上海201106 [2]东北农业大学生物工程系,中国哈尔滨150030

出　　处：《Developmental and Reproductive Biology》1999年第1期17-23,共7页发育与生殖生物学报（英文版）

摘　　要：组织型纤维原激活剂（tPA）的作用是激活血纤维蛋白酶原，从而溶解血栓。生物体内tPA的含量很低，远远不能满足临床需要。为了利用转基因动物生产tPA，需要对所用tPA乳腺表达载体pSVL－WAP－tPA2（Fig．1）进行予证。将三种特研究载体用脂质体包埋，注入中后期怀孕母兔乳腺。对乳汁、乳腺组织的mRNA和DNA分别进行检测。实验兔分娩后，每4天取乳汁冻存，ELISA检测其中tPA含量（Fig.2)，泌乳期第4天最高可达600ng/ml。又，于乳腺注射第3天，手术切取部分乳腺组织，制备总RNA，以β－Casein启动子下游序列（TAC TAG…）为引物I，tPA上游序列（TTC CCA…）为引物II，做RT－PCR检测，表明：此时已有tPAmRNA转录（Fig.3)。再，于停乳后30天左右，切取部分乳腺制备DNA，以tPAcDNA为探针，做Southern杂交检测。表明：无tPA整合，仅是以附合体形式存在（Fig.4)。上述质粒直接注射技术是予证转基因用载体表达水平的快捷、简便方法。

关 键 词：TPA CDNA 兔 乳腺表达 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]