重组人胸腺素原α在大肠杆菌中的表达优化  

Optimizing Expression of Recombinant Human Prothymosinαin E.coli

作　　者：杨旭[1] 郭葆玉[1] 叶正良[1] 道书艳[1] 张冉[1] 

机构地区：[1]第二军医大学药学院生化药学教研室,上海200433

出　　处：《药物生物技术》2001年第3期135-138,共4页Pharmaceutical Biotechnology

摘　　要：在 1 5L的生物反应器内 ,对重组人胸腺素原α(huPTMAα)在大肠杆菌TG 1中经IPTG诱导后的表达条件进行优化 ;应用NBS MICROS 1 5L T DR型生物反应器 (1 5L) ,用工程菌E colipGEX IN/PTMA ,研究了诱导时不同的pH、温度、搅拌速率和IPTG浓度 ,利用正交试验对发酵条件进行了优化。经 1次预试验和 9次正式试验结果表明 ,huPTMAα的表达受溶氧条件的影响较显著 ,其中搅拌速率和通气量为最大的影响因子 ,当其为 2 5 0r/min时 ,表达水平最高。经SDS PAGE和凝胶扫描发现表达蛋白占菌体蛋白的 60 %以上。该实验为工程菌的中试提供了最佳的表达诱导条件 ,对其稳定性 。To optimize the expression of recomb inant human prothymosinα(huPTMAα) in TG-1 induced by IPTG in 15L NBS fermento r. The E.Coli pGEX-IN/PTMA was constructed by our laboratory and differ ent pH,temperature,agitation rate and concentration of IPTG were studied by orthogonal experimental design.We found that the expression level is remarkable affected by the amount of dissolv ed oxygen, which suggests the agitation rate is the most important parameter dur ing fermentation.Examined by SDS-PAGE and gel scanning, the expression level of total protein is over 60% when agitation rate is 250r/min and therefore we ha ve established a method for high-level expression of huPTMAα on pilot-scale

关 键 词：重组人胸腺素原α 大肠杆菌 正交设计 试验 高效表达 

分 类 号：Q81[生物学—生物工程]