一种高效的重组腺伴随病毒载体生产系统  

作　　者：伍志坚[1] 吴小兵[1] 曹晖[1] 董小岩[1] 王宏[1] 侯云德[1] 

机构地区：[1]中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室,北京100052

出　　处：《中国科学（C辑）》2001年第5期423-430,共8页Science in China(Series C)

基　　金：国家"八六三"高科技发展计划基因治疗重大关键技术资助项目(批准号: 863-BH03-05-02)

摘　　要：重组腺伴随病毒(recombinant adeno-associated virus, rAAV)载体是目前较理想的基因治疗载体之一, 但难以大规模制备一直是影响其广泛应用的主要因素. 曾组建了一种表达2型腺伴随病毒 (adeno-associated virus type 2, AAV-2) Rep和Cap的重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/DUL2, 现在此基础上, 证实了该重组病毒支持rAAV的复制与包装, 包装出的rAAV具有感染性; 构建了携带新霉素抗性基因、适合多种外源基因插入的通用型rAAV载体质粒pSNAV-2 及表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的rAAV载体质粒pSNAV-2-GFP, 建立了稳定携带GFP基因表达盒的rAAV载体细胞株; 确定了HSV1-rc/DUL2感染载体细胞株时的最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI)为0.1; 采用"一种病毒感染一个载体细胞株"的策略, 用"感染"的方式代替传统的"转染"方式, 使每个细胞产生的rAAV比传统方式提高了2个数量级以上, 并实现了rAAV的规模化制备, 为rAAV用于基因治疗的临床试验打下了基础.

关 键 词：重组腺伴随病毒 重组1型单纯疱疹病毒 载体 基因治疗 生产系统 绿色荧光蛋白 转染方式 

分 类 号：Q782[生物学—分子生物学]