层理鞭枝藻pecF基因的N端缺失及其表达  

Deletion at N-end and expression of gene pecF from Mastigocladus laminosus

作　　者：周明[1] 马聪[1] 赵开弘[1] 

机构地区：[1]华中科技大学环境科学与工程学院,武汉430074

出　　处：《华中师范大学学报（自然科学版）》2002年第1期80-84,共5页Journal of Central China Normal University：Natural Sciences

基　　金：国家自然科学基金 (39770 175 );湖北省科技攻关 (2 0 70 0 0 331)资助

摘　　要：采用PCR技术 ,以层理鞭枝藻DNA为模板 ,扩增藻红蓝蛋白重组酶F基因 (pecF)部分DNA片段 ,从而获得pecF的N端缺失突变 ,该片段 (pecFn)的大小为 4 86bp .把pecFn插入pBluscript的多克隆位点得重组质粒pBlu pecFn ,经DNA序列测定 ,与文献报道的pecF基因该部分序列一致 .表达载体pGEMD经PvuⅡ、XhoⅠ双酶切消化 ,与pecFn连接 ,酶切鉴定pecFn已正确插入到该表达载体中 .将表达质粒pGEMD pecFn转化E .coliBL2 1(DE3) ,细胞经IPTG诱导 ,获得了高效表达 ,表达蛋白质的分子量为 18kDa。By PCR, phycoerythrocyanin F gene (pecF) with deletion at N end (pecFn) is amplified from Mastigocladus laminosus DNA, and DNA pecFn is 486 bp. DNA pecFn is the inserted into the multiclonal site of pBluescript to give pBlu pecFn, which is confirmed with sequencing. Then pecFn is transferred to expression vector pGEMD to give pGEMD pecFn, confirmed by physical mapping. Vector pGEMD pecFn is transformed into E.coli BL21(DE3). After induction of IPTG, pecFn was overexpressed to give the protein of 18 kDa in inclusion body.

关 键 词：藻红蓝蛋白 基因克隆 基因表达 层理鞭枝藻 pecF基因 N端缺失 原核蓝绿藻 

分 类 号：Q949.22[生物学—植物学] Q786