嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶基因perA在大肠杆菌中的高效表达  

EXPRESSION OF CATALASE GENE perA FROM BACILLUS STEAROTHERMOPHILUS IN RECOMBINANT E. COLI

作　　者：王凡强[1] 王正祥[1] 邵蔚蓝[1] 刘吉泉[1] 徐成勇[1] 诸葛健[1] 

机构地区：[1]江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室,无锡214036

出　　处：《应用与环境生物学报》2002年第2期219-222,共4页Chinese Journal of Applied and Environmental Biology

摘　　要：利用PCR技术得到嗜热脂肪芽孢杆菌 (Bacillusstearothermophilus)过氧化氢酶基因 perA ,将该基因与表达载体 pKK2 2 3 3连接构建重组质粒pK perA ,转化大肠杆菌过氧化氢酶HPⅠ和HPⅡ双缺突变株UM 2 ,得到重组大肠杆菌UM 2 1.酶活测定结果表明 ,表达产物具有正常的生物学活性 .SDS PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带 ,单体Mr =86× 10 3 ,与嗜热脂肪芽孢杆菌所产酶相同 .实验表明 ,重组质粒在宿主UM 2中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下传代 6 0次基本保持稳定 ,传代 10 0次重组质粒保留 80 %以上 .摇瓶实验确定重组菌的最佳表达条件为 :IPTG浓度 ,0 .75mmol/L ;诱导时间 3h ;培养基起始 pH 6 .5 ;诱导温度 37℃ ;装液量 5 0mL/ 2 5 0mL .在优化条件下 ,重组菌产生的过氧化氢酶占菌体总蛋白的 8% ,酶活力可达 35U/mL ,是原始菌株BacillusstearothermophilusIAM110 0 1的 11.7倍 .图 2表 1参Catalase(EC 1.11.1.6) gene from Bacillus stearothermophilus IAM11001 was amplified by PCR and inserted into EcoRⅠsite of pKK223-3 to creat the recombinant plasmid pK-perA, then the catalase double deficient mutant E.coli was transformed by pK-perA. Some factors affecting the catalase production from the recombinant E.coli were studied. The results showed that the optimal conditions for expression of perA were as follows: IPTG concentration, 0.75 mmol/L; inducing time, 3 h; inducing temperature, 37 ℃; initial pH, 6.5; broth volume, 50 mL/250 mL. The expression level of recombinant catalase can be up to 8% of total proteins. The catalase activity was 35 U/mL , which was 11.7 fold that of Bacillus stearothermophilus. Fig 2, Tab 1, Ref 10

关 键 词：perA 大肠杆菌 嗜热脂肪芽孢杆菌 过氧化氢酶 表达 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]