A群猪轮状病毒G5型OSU株VP7基因的克隆及其重组杆状病毒的鉴定  

作　　者：徐宏军[1] 师东方[1] 李一经[1] 王君伟[1] 贾永清[1] 

机构地区：[1]东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨150030

出　　处：《中国兽医科技》2002年第6期18-20,共3页Chinese Journal of Veterinary Science and Technology

摘　　要：利用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增出A群猪轮状病毒 (PRV)G5型OSU株长度约为 1.0kb的基因片段 ,将其克隆到 pMD 18 T载体上进行测序鉴定 ,证明为该PRV的VP7蛋白基因 ,与已发表的该PRVVP7基因序列的同源性为 99.8%。将该基因黏端克隆至表达载体PblueBAChisC质粒中 ,酶切及PCR鉴定表明获得了PRV VP7蛋白基因与PblueBAChisC质粒的阳性重组子。纯化该重组质粒并与线性杆状病毒DNA分子Bac N Blue共转染昆虫细胞sf9,5d后收获重组病毒。通过对重组杆状病毒DNA分子的酶切及PCR鉴定 ,确定PRV VP7基因已正确插入。将经 3次蚀斑筛选纯化后的该重组杆状病毒接种于sf9细胞大量增殖后 ,获得了重组杆状病毒PRV

关 键 词：猪轮状病毒 VP7基因 克隆 重组杆状病毒 

分 类 号：S852.659.4[农业科学—基础兽医学]