重症肌无力伴胸腺增生患者胸腺内miR-548k调控CXCL13表达的研究  

Intrathymic miR-548k modulating CXC chemokine ligand 13 expression in myastheula gravis patients with thymic hyperplasia

作　　者：李劲频[1] 陈泽志[1] 邱笛[1] 杜伟伟[1] 刘竞丽[1] 莫雪安[1] 

机构地区：[1]广西医科大学第一附属医院神经内科,南宁530021

出　　处：《中华神经医学杂志》2014年第10期1008-1013,共6页Chinese Journal of Neuromedicine

基　　金：基金项目：广西自然科学基金（2014GXNSFAA118262）;广西壮族自治区卫生厅科研资助项目（Z2007084）

摘　　要：目的 探讨重症肌无力伴胸腺增生（MGH）患者胸腺内B细胞趋化因子13（CXCL13）表达的微小RNA（miRNAs）调控机制。方法 收集26例胸腺标本，分别来源于自2012年3月至2013年8月在广西医科大学第一附属医院心胸外科住院确诊为重症肌无力并行胸腺完整切除术的13例患者（MGH组），以及同期因先天性心脏病行开胸治疗并在手术过程中切除胸腺的13例患者（对照组）。应用miRNAs基因芯片筛选MGH组与对照组之间表达有差异的miRNA；应用生物信息学预测方法并结合miRNAs芯片检测结果寻找靶向B细胞趋化因子13（CXCL13）的miRNA；对CXCL13mRNA和预测的miRNAs在MGH组与对照组胸腺内的表达进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析，然后进行双荧光报告分析微小RNA-548k（miR-548k）模拟物组与空白对照组的CXCL13-3’非翻译区（UTR）双荧光载体荧光素酶活性。结果 （1）miRNAs芯片筛选结果显示，在MGH患者胸腺内呈显著差异表达的miRNAs有33个，其中miR-548k是下调最显著的一个（1．98倍）。（2）生物信息学预测显示，miR-548k与CXCL13的3’UTR有明显的相互作用。（3）qRT-PCR定量分析发现，MGH组胸腺内miR-548k的表达量较对照组明显下调（0．55±0．20vs1．33±0．36）．差异有统计学意义（P〈0．05）；MGH组胸腺内CXCL13的表达量较对照组明显上调（4．93±1．95vs1．04±0．20），差异有统计学意义（P〈0．05）；MGH组胸腺内miR-548k与CXCL13表达呈明显负相关（r=-0．93，P=0．003）。（4）双荧光报告分析显示，miR-548k模拟物组的CXCL13-3’UTR双荧光载体荧光素酶活性较空白对照组下降约61．5％（0．385±0．016vs1．000±0．0501，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 MGH患者胸腺内miR-548k的低表达很可能通过转录后基因沉默机制使其靶基因CXCL13过表达，从而参与重症肌无力的发生发展。Objective To explore the microRNAs regulation of CXC chemokine ligand 13 （CXCL13） in patients with myasthenia gravis combined with thymic hyperplasia （MGH）. Methods Thirteen MGH tissues and 13 normal thymus tissues, collected in our hospital from March 2012 to August 2013, were used in our study. Total RNAs from these tissues were extracted by trizol and hybridized with the microarray. The miRNAs targeting CXCL13 gene -3＇untranslated region were predicted by using bioinformatics. Real-time fluorogertic quantitative PCR （QRT-PCR） was employed to detect the expressions ofCXCL13 mRNAs and microRNAs in thymus tissues. Luciferase assay was used to analyze the miRNAs modulated CXCL13 expression. Results The miRNA microarray chip analysis identified 33 miRNAs differentially expressed in MGH tissues as compared with those in the control group, miR-548k was one of most obvious down-regulated miRNAs （1.98 fold）. Bioinformatical analysis indicated that miR-548k can target CXCL13 3＇ UTR. QRT-PCR showed that the expression of CXCL13 mRNA was up-regulated and miR-548k was down-regulated in thymus hyperplasia tissues of MGH group as compared with those in the control group（4.93±l.95 vs. 1.04±0.20; 0.55±0.20 vs. 1.33±0.36, P〈0.05）; and they showed a negative correlation （r=-0.93, P=0.003）. As compared with that in the control group （1.000±0.050）, the luciferase activity of pmiR-RB-REPORTTM-CXCL13-3＇UTR treated with miR-548k mimics （0.385±0.016） decreased 61.5%, with significant difference （P〈0.05）. Conclusion MiR-548k inhibits CXCL13 expression by post-transcriptional gene silencing to promote MG development and progression.

关 键 词：重症肌无力伴胸腺增生 B细胞趋化因子13 微小RNA-548k 

分 类 号：R746.1[医药卫生—神经病学与精神病学]