南瓜蛋白诱导人胰腺癌细胞凋亡的线粒体机制  

Mitochondrial mechanism apoptosis induced by cucurmosin in pancreatic cancer cells

作　　者：许春森[1] 黄鹤光[1] 陈明晃[2] 谢捷明[3] 

机构地区：[1]福建医科大学附属协和医院普外科,福州350001 [2]中国科学院福建物质结构研究所结构化学国家重点实验室 [3]福建医科大学药学院

出　　处：《中华实验外科杂志》2015年第1期15-17,共3页Chinese Journal of Experimental Surgery

基　　金：国家自然科学基金资助项目（30772587）;福建省自然科学基金资助项目（C0510012）

摘　　要：目的 探讨南瓜蛋白（CUS）诱导人胰腺癌细胞（PANC）-1凋亡的线粒体机制.方法 0、2.5、10.0、40.0 mg/L的CUS处理胰腺癌PANC-1 72 h,荧光显微镜和流式细胞仪观察线粒体膜电位（△Ψm）的变化,Western blot检测胞质细胞色素C（Cyt-C）的含量变化和细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9（Caspase-9）和Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（bax）蛋白的表达水平.结果 0、2.5、10.0、40.0 mg/L CUS处理PANC-1 72 h后,△Ψm逐渐下降,分别为167.23±8.27、123.56±7.26、83.25±5.36和40.45±5.87,差异有统计学意义（P＜0.05）;Western blot结果显示线粒体Cyt-C释放到细胞质的量逐渐增加,灰度值分别为0.29±0.05、1.69±0.35、1.87±0.40、2.47±0.32（P＜0.05）;Caspase-9、Caspase-3和bax蛋白的表达逐渐增强,且其作用呈剂量依赖性（Caspase-9灰度值分别为0.15±0.03、0.19±0.05、0.49±0.09、0.89±0.08,P＜0.05;Caspase-3灰度值分别为0.88±0.08、1.81±0.19、2.36±0.38、2.92±0.24,P ＜0.05;bax灰度值分别为0.79±0.18、1.66±0.31、2.61±0.41、3.67±0.24,P＜0.05）;而bcl-2蛋白表达无明显变化（bcl-2灰度值分别为0.88±0.08、0.82±0.18、0.84±0.04、0.82±0.13,P＞0.05）.结论 线粒体途径在CUS诱导胰腺癌细胞凋亡中起重要作用,其机制可能是CUS通过激活促凋亡蛋白bax表达增加,降低△Ψm,促进线粒体Cyt-C的释放,从而激活Caspase系列酶,诱导胰腺癌细胞凋亡.Objective To study whether cucurmosin-induced apoptosis in pancreatic cancer cells （PANC）-1 is via a mitochondrial pathway.Methods PANC-1 cells were treated with various concentrations （0,2.5,10.0 and 40.0 mg/L） of cucurmosin for 72 h.The change of mitochondrial transmembrane potential （△Ψm） was measured by fluorescent staining and flow cytometry analysis; Western blotting analysis was performed to evaluate the expression levels of cytochrome C （Cyt-C） in cytoplasm,Caspase-9,Caspase-3,B-cell leukemia/lymphoma-2 （bcl-2） and bc1-2 associated X protein （bax）.Results When treated with various concentration of cucurmosin （0,2.5,10.0,40.0 mg/L） for 72 h,the level of mitochondria membrane potential （167.23 ±8.27,123.56 ±7.26,83.25 ±5.36 and 40.45 ±5.87,respectively） was declined significantly （P 〈0.05）.Western blotting revealed that the amount of Cyt-C in cytoplasm was increased （0.29 ± O.05,1.69 ± 0.35,1.87 ± 0.40,2.47 ± 0.32,P 〈 0.05） and the activity of Caspase-9 （0.15 ± 0.03,0.19 ± 0.05,0.49 ± 0.09,0.89 ± 0.08,P 〈 0.05） and Caspase-3 （0.88 ±0.08,1.81 ± 0.19,2.36 ± 0.38,2.92 ± 0.24,P 〈 0.05） were increased in a dose-dependent manner.The expression of bax protein （0.79 ±0.18,1.66 ±0.31,2.61 ±0.41,3.67 ±0.24,P 〈0.05） was also increased in a dose-dependent manner,while bcl-2 level （0.88 ± 0.08,0.82 ± 0.18,0.84 ± 0.04,0.82 ± 0.13,P 〉 0.05） was not significant altered by cucurmosin.Conclusion Cucurmosin induced the apoptosis of PANC-1 cells via the up-regulation of Bax gene,leading to release of mitochondrial Cyt-C and then activation of Caspase-9 and Caspase-3.Thus apoptosis induced by cucurmosin is through a mitochondrial-mediated pathway.

关 键 词：南瓜蛋白 胰腺癌 凋亡 线粒体 

分 类 号：R735.9[医药卫生—肿瘤]