高效液相色谱法测定三种虫草发酵液与菌丝体核苷化合物含量  

Determination of Nucleosides in Fermentation broth and Mycelium of three Cordyceps by High-performance Liquid Chromatography

作　　者：孙忠华[1,2] 肖建辉[2] 迟强[1] 范成路[1] 徐珺阳 林志平[1] 

机构地区：[1]中国人民解放军第215医院全军心理卫生中心睡眠调整中心,大连116041 [2]遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室,遵义563003

出　　处：《天然产物研究与开发》2014年第12期2000-2003,2061,共5页Natural Product Research and Development

基　　金：国家自然科学基金(20762017);贵州省优秀青年科技人才培养支持计划(2007-10);贵州省科学技术基金(2007-2149);遵义市"15851人才工程"第一二层次人才培养计划(2009-07)

摘　　要：本项研究测定了三种虫草(江西虫草、古尼虫草、戴氏虫草)发酵液与菌丝体中核苷类化合物的含量,并建立了定量分析的方法体系。其中,采用液体发酵的方法获得虫草菌丝体及其发酵液,应用超声破碎法提取虫草菌丝体中的核苷类化合物,最后应用高效液相色谱法-二极管阵列检测器进行色谱分析,并以保留时间和吸收光谱双指标作为定性依据。实验取得了预期结果:优化了5种核苷化合物:腺苷、虫草素、尿苷、肌苷、鸟苷的色谱分离条件,分析了3种虫草中核苷类化合物的含量,精密度、稳定性、重现性和回收率实验表明这一方法可高效地定量分析虫草中的核苷类化合物。实验表明,HPLC-DAD法对虫草中的核苷类化合物的定量分析是一种有效的方法,该方法可快速准确地检测虫草有效成分的含量,本研究同时测定了胞外部分的化合物含量,系首次对这三种虫草细胞内外成分同时进行测定,对虫草的品质评价体系及其质量控制标准的建立具有重要意义。Five nucleosides（ adenosine,cordycepin,uridine,inosine and guanosine） in three cordyceps（ Cordyceps jiangxines,Cordyceps gunni,Cordyceps taii） were quantified using a developed high-performance liquid chromatography-diode array detector（ HPLC-DAD） method. The mycelium and fermentation broth was obtained by the submerged cultivation.The nucleosides compoundswas extracted through ultrasonic fracture method. HPLC-DAD was applied for the quantitative analysis with retention time andabsorption spectrum adopted as qualitative evidences. The chromatographic separation conditions were optimized. The precision,stability,reproducibility and recovery were good which indicated the developed HPLC-DAD was valid for the quantification ofnucleosides. This was the first report of determining nucleosides contents in both intracellular and extracellular parts of three cordyceps.

关 键 词：虫草 发酵 菌丝体 核苷 高效液相色谱法 定量分析 

分 类 号：R917[医药卫生—药物分析学]