p38α半胱氨酸点突变体真核表达载体的构建和表达  

Construction and expression of Cys mutant genes of p38α eukaryotic expression plasmid vectors

作　　者：岳军[1] 齐素华[1] 

机构地区：[1]徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心,江苏省脑病生物信息重点实验室,江苏徐州221004

出　　处：《实验室科学》2015年第1期19-21,共3页Laboratory Science

基　　金：江苏省高校自然科学研究计划(项目编号:13KJA310005;11KJB310012);2011年江苏省大学创新计划项目(项目编号:990)

摘　　要：以pFLAG-CMV-5.1-p38α为模板,应用PCR定点突变技术将p38α的第39、119、162和211位半胱氨酸(Cys)点突变体定点突变为丙氨酸(Ala)(C39A、C119A、C162A、C211A),使用琼脂糖凝胶电泳及基因测序检测其结果;并采用脂质体转染法将p38α的野生型和突变体质粒分别转入HEK293细胞,免疫印迹鉴定野生型及其突变体p38蛋白表达。结果显示,构建的C39ApFLAG-CMV-5.1、C119ApFLAGCMV-5.1、C162ApFLAG-CMV-5.1和C211ApFLAG-CMV-5.1重组载体成功点突变,并在HEK293细胞中高效表达,为深入研究p38在缺血性脑损伤中的作用及机制打下基础。Take p FLAG-CMV-5. 1-p38α as a template,mutant genes 39,119,162 and 211 from Cys to Ala of p38α were amplified by PCR. And then the wild type mutant p38α genes were transformed into HEK293 cells by lipofection. The results indicated that the correct clonings of C39 A p FLAG-CMV-5. 1,C119 A p FLAG-CMV-5. 1,C162 A p FLAG-CMV-5. 1 and C211 A p FLAG-CMV-5. 1 were confirmed by DNA electrophoresis and sequencing. And the wild type of mutant p38α proteins were highly expressed in HEK293. It will provide a base for investigating the role and the mechanism of p38α in ischemic brain damage.

关 键 词：p38α 真核表达载体 HEK293细胞 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学] R743.3[医药卫生—神经病学与精神病学]