吡柔比星对膀胱癌EJ细胞增殖及Livin和Caspase-3表达的影响  

Experimental study of pirarubicin-induced Livin and Caspase-3 expression in bladder cancer EJ cells

作　　者：李鹏程[1] 李飞[2] 宋亚辉[1] 廖然[1] 周理[1] 葛波[3] 

机构地区：[1]桂林医学院研究生院,桂林医学硕士541001 [2]新疆医科大学研究生院,乌鲁木齐830011 [3]桂林医学院附属医院泌尿外科,桂林541001

出　　处：《医学研究生学报》2015年第3期255-259,共5页Journal of Medical Postgraduates

基　　金：广西壮族自治区高等学校科研资助项目(200103YB092);广西壮族自治区教育厅科研项目(200911LX290)

摘　　要：目的吡柔比星为半合成的蒽环类抗癌药,常用于膀胱癌术后,预防肿瘤的复发。文中探讨吡柔比星对体外培养人膀胱癌EJ细胞株增殖情况及对相关基因Livin、Caspase-3表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法使用不同浓度的吡柔比星(0、0.1、1、10μg/m L)分别处理EJ细胞株,通过细胞增殖曲线实验检测不同浓度吡柔比星对EJ细胞株生长的影响;倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞术检测不同浓度吡柔比星作用EJ细胞24 h后,膀胱癌EJ细胞周期的分布变化;RTPCR法检测不同药物浓度作用后Livin、Caspase-3 mRNA表达的情况;Western blot法检测确认Livin、Caspase-3蛋白的表达情况。结果 0μg/m L吡柔比星作用EJ细胞24 h后,细胞大小均一,轮廓清楚。随吡柔比星浓度升高(0.1、1、10μg/m L),EJ细胞缩小变形明显,细胞逐渐萎缩、碎裂。与0μg/m L吡柔比星比较,0.1、1、10μg/m L吡柔比星干预膀胱癌EJ细胞24、48、72 h后,细胞的增殖活性明显受到抑制(P<0.05),0.1、1、10μg/m L吡柔比星间及各时间点间(24、48、72 h)EJ细胞A值差异有统计学意义(P<0.05)。细胞增殖抑制率随吡柔比星浓度升高、作用时间延长而升高,有明显的时间-剂量效应关系(P<0.05)。0.1、1、10μg/m L吡柔比星作用EJ细胞24 h后,Livin mRNA表达水平(0.63±0.09、0.44±0.06,、0.21±0.02)较0μg/m L吡柔比星(0.84±0.07)明显降低(P<0.05),而Caspase-3 mRNA表达水平(0.31±0.08、0.52±0.04、0.75±0.01)较0μg/m L吡柔比星(0.12±0.03)明显升高(P<0.05);Livin蛋白表达水平(0.43±0.08、0.26±0.06、0.11±0.01)较0μg/m L吡柔比星(0.74±0.03)明显降低(P<0.05),而Caspase-3蛋白表达水平(0.41±0.07、0.62±0.03、0.90±0.06)较0μg/m L吡柔比星(0.22±0.02)明显升高(P<0.05)。结论吡柔比星抑制EJ细胞增殖、诱导其凋亡的关键机制可能与下调EJ细胞中Livin蛋白的表达、上调Caspase-3蛋白的表达,并使细胞阻滞于G2期有关。[Abstract ] Objective Pirarubicin（THP） was semisynthetic anthracycline anticancer drug , which was commonly used in bladder cancer to prevent tumor recurrence .The study was to investigate the proliferation in human bladder cancer cell line EJ induced by different concentrations of THP and the influence of THP on the expressions of Livin and Caspase -3 protein, along with the possible mechanism of action . Methods EJ cells were cultured in vitro and incubated with different concentrations of THP （0,0.1,1,10μg/mL） respectively.The morphological changes of the EJ cells was observed by inverted microscope .The cell proliferation was measured by growth curve .The distribution changes of EJ cells cycle was tested by flow cytometry .The expressions of Livin and Caspase-3 after the effect of different concentrations of THP were detected by using reverse transcription -polymerase chain reaction （ RT-PCR） assay,

关 键 词：膀胱癌 细胞周期 吡柔比星 CASPASE-3 CASPASE-3 

分 类 号：R737.4[医药卫生—肿瘤]