筛选肿瘤细胞中的瓜氨酸化蛋白  

Screening of citrullinated proteins in ten tumor cell lines

作　　者：张伟[1] 马立宁[1] 隋赟[1] 常晓天[2] 

机构地区：[1]山东省济南市第二人民医院内科,250001 [2]山东省千佛山医院医学研究中心

出　　处：《中华肿瘤杂志》2015年第3期165-169,共5页Chinese Journal of Oncology

基　　金：国家自然科学基金（81171990、81373218）;山东省自然科学基金（ZR2010CM1032、ZR2011CQ028）

摘　　要：目的：筛选肿瘤细胞中的瓜氨酸化蛋白。方法培养食管癌、肝癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、宫颈癌、结肠癌、肾癌、胰腺癌和胃癌细胞系，用2张相同凝胶在相同条件下对肿瘤细胞系中提取的蛋白进行二维电泳（2－DE）分析；将其中1张2－DE凝胶上的蛋白印迹转印至聚偏氟乙烯膜上，用抗瓜氨酸抗体杂交后检测免疫信号。将二维蛋白质印迹法（2－D WB）结果与另外1张2－DE蛋白图谱进行对比，将显示瓜氨酸免疫信号的蛋白从第2张2－DE凝胶中收集并进行质谱鉴定，以确定瓜氨酸蛋白。用免疫共沉淀法验证各肿瘤细胞系中瓜氨酸化蛋白的表达。结果2－DWB和质谱分析结果显示，培养的肿瘤细胞系中存在瓜氨酸化的α－烯醇化酶（ ENO1）、热休克蛋白60（ HSP60）、细胞角蛋白8（KRT8）、微管蛋白β（TUBB）、T细胞受体β链（TCRβ）、波形蛋白和蛋白质二硫化物异构酶。免疫共沉淀法分析结果显示，肿瘤细胞中有ENO1、HSP60、KRT8和TUBB的瓜氨酸化和表达。结论肿瘤细胞系中存在ENO1、HSP60、KRT8和TUBB被瓜氨酸化的现象。Objective The conversion of arginine into citrulline, termed citrullination, has important consequences for the structure and function of proteins.The present study aimed to identify novel citrullinated proteins in 10 tumor cell lines by 2-D Western blotting （2-D WB）.Methods Two identical two-dimensional electrophoresis （2-DE） gels were prepared using extracts from ten cultured human tumor cell lines： ECA （ esophageal cancer cells ） , HEPG2 （ hepatocellular carcinoma cells ） , SKOV3 （ ovarian cancer cells）,MCF-7 （breast cancer cells）,H292 （lung mucoepidermoid carcinoma cells）, HeLa （cervical cancer cells）, Lovo （colon cancer cells）, OS-RC （renal cell carcinoma cells）, PANC-1 （pancreatic cancer cells）, and SGC （gastric cancer cells）.The expression profiles on one 2-DE gels were trans-blotted to PVDF membranes, and the blots were then probed with an anti-citrulline antibody.By comparing the 2-DE profile with the parallel 2-D WB profile at a global level, protein spots with immuno-signals were collected from the second 2-DE gel and identified using mass spectrometry.Immunoprecipitation was used to verify the expressionandcitrullinationofthetargetedproteinsinthetumorcelllines.Results 2-DWBandmass spectrometry identified citrullinated ENO1 （α-enolase）, HSP60 （heat shock protein 60）, KRT8 （keratin 8）, TUBB （tubulin beta）, TCRβ（T cell receptor βchain）, VIME （vimentin） and PDI in these cell lines.Immunoprecipitation analyses verified the expression and citrullination of ENO1, HSP60, KRT8, and TUBB in the total protein lysates of the tumor cell lines.Conclusion The citrullination of proteins ENO1, HSP60, KRT8, and TUBB suggests a new mechanism in the tumorigenic process.

关 键 词：肿瘤 蛋白质 瓜氨酸化 二维蛋白质印迹法 

分 类 号：R73-3[医药卫生—肿瘤]