嗜酸嗜热古菌Sulfolobus acidocaldarius编码尿嘧啶DNA糖苷酶表达,纯化与酶学特征  

Cloning,expression,purification and characterization of two uracil-DNA glycosylases from Sulfolobus acidocaldarius

作　　者：王婧[1,2] 易刚顺 欧杰[2] 刘建华[1] 刘喜朋[1] 

机构地区：[1]上海交通大学生命科学技术学院,上海200240 [2]上海海洋大学食品学院,上海201306

出　　处：《微生物学报》2015年第8期1036-1041,共6页Acta Microbiologica Sinica

基　　金：国家自然科学基金(J1210047);上海市自然科学基金(12ZR1413700)~~

摘　　要：【目的】嗜高温微生物面临d C脱氨基生成d U损伤的巨大压力,鉴定嗜酸嗜热古菌S.acidocaldarius来源的尿嘧啶DNA糖苷酶(UDG)切除d U损伤的酶学活性。【方法】重组表达来源于S.acidocaldarius的IV和V型UDG,经亲和纯化得到电泳纯重组蛋白。然后利用人工合成的d U(deoxyuracil)修饰寡核苷酸片段作为底物,体外鉴定两种重组UDG的酶学特性。【结果】来源于S.acidocaldarius的IV和V型重组UDG具有相似的酶学特性。IV型UDG催化效率更高,比活性是V型重组UDG的750倍左右。作为来自嗜热微生物的蛋白,S.acidocaldarius的IV和V型UDG的最适反应温度为65-75℃。【结论】IV型UDG比V型UDG水解d U碱基和脱氧核糖之间糖苷键的能力更强。[Objective ] To characterize uracil-DNA glycosylase from acidophilic and thermophilic Sulfolobus acidocaldarius. [Methods] We cloned udg IV and udg V genes from S. acidocaldarius,expressed the two recombinant UDG proteins in E. coli species BL21（ DE3） Rosetta-p Lys S,purified the recombinant UDGs and characterized the removal of d U by UDGs. [Results]We successfully expressed two S. acidocaldarius UDGs and found both UDGs having the activity of d U removal. In comparison to UDGV,UDGIV was more efficient in d U removal,with a 750-foldactivity.[Conclusion]In comparison to UDGV,UDGIV from S. acidocaldarius was a more efficient enzyme responsible for the removal of d U from DNA in vitro.

关 键 词：古菌 嗜酸嗜热硫化叶菌 dU碱基损伤 DNA修复 尿嘧啶DNA糖苷酶 

分 类 号：Q936[生物学—微生物学]