核酸适体检测赭曲霉毒素A荧光方法的建立  

作　　者：桂海娈 金庆日[1] 张亚军[1] 王晓杜[1] 杨永春[1] 邵春艳[1] 程昌勇[1] 卫芳芳[1] 杨杨[1] 杨梦华[1] 宋厚辉[1] 

机构地区：[1]浙江农林大学动物科技学院,浙江临安311300

出　　处：《浙江畜牧兽医》2015年第3期1-5,共5页Zhejiang Journal Animal Science and Veterinary Medicine

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)(2012AA101602);浙江省大学生科技创新活动计划资助项目(2014R412040);浙江农林大学人才启动项目(2011FR025;2013FR012;2012FR047;2013FR076;2013FR054)

摘　　要：赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)普遍存在于谷物等粮食和动物饲料中,是一种可以引起癌症的霉菌毒素。为了快速检测OTA,利用荧光染料PicoGreen识别双链DNA原理,建立了一种基于核酸适体与PicoGreen检测毒素OTA的方法。在10 mmol/L Tris,120 mmol/L Na Cl,5 mmol/L KCl,20 mmol/L CaCl2(pH8.5)缓冲液中,PicoGreen与双链DNA结合后,释放的荧光在3 min内达到峰值(激发波长为480 nm,发射波长为520 nm)。从加样到荧光检测,整个流程可在40 min内完成。检测OTA的灵敏度为1μg/L;检测范围为1μg/L^200μg/L。特异性实验表明:OTA核酸适体-Pico Green方法与黄曲霉毒素B1、伏马毒素B1、桔毒素和玉米赤霉烯酮等霉菌毒素无交叉反应。本方法在检测敏感性和特异性方面与传统抗体ELISA方法相当(Kappa值为:0.857)。由于核酸适体成本比抗体低,因此本方法比抗体ELISA方法更具实用价值。

关 键 词：赭曲霉毒素A 核酸适体 荧光 检测 

分 类 号：S859.84[农业科学—临床兽医学]