SIS3逆转多药耐药肝癌细胞的干性作用  

Reversal of stemness in multidrug-resistant hepatocellular carcinoma cells by SIS3

作　　者：严威[1] 文霆[1] 林素琼[1] 刘中财 杨文超[1] 吴国洋[1] 

机构地区：[1]厦门大学附属中山医院普通外科,361004

出　　处：《中华肿瘤杂志》2015年第10期731-735,共5页Chinese Journal of Oncology

基　　金：国家自然科学基金面上项目（81172285）;厦门市杰出青年科技人才创新计划项目（3502220116010）

摘　　要：目的：探讨Smad3特异性抑制剂（ SIS3）逆转多药耐药肝癌细胞的干性作用。方法采用阿霉素（ADM）浓度梯度递增诱导法，诱导亲本细胞，建立人肝癌多药耐药细胞系Huh7．5．1／ADM，采用CCK-8法检测化疗药物的敏感性，采用流式细胞仪检测干细胞表面标志物CD133的表达，采用平板克隆实验观察细胞集落的生长情况。采用裸鼠成瘤实验验证肝癌细胞的成瘤能力。 Western blot检测 CD133、Smad3、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果应用ADM成功诱导建立的人肝癌多药耐药细胞Huh7．5．1／ADM具有肝癌干细胞特性。亲本Huh7．5．1细胞对 ADM、长春新碱（VCR）、丝裂霉素（MMC）、环磷酰胺（CTX）的半数抑制浓度（IC50）分别为（0．123±0．004）μg／ml、（0．014±0．002）μg／ml、（0．071±0．006）μg／ml和（1．919±0．032）μg／ml，Huh7．5．1／ADM细胞的IC50分别为（0．215±0．018）μg／ml、（0．145±0．009）μg／ml、（1．021±0．119）μg／ml和（27．007±1．606）μg／ml，差异均有统计学意义（均P＜0．05）；SIS3处理后Huh7．5．1／ADM／SIS3细胞的IC50分别为（0．112±0．019）μg／ml、（0．065±0．013）μg／ml、（0．749±0．121）μg／ml和（10．576±1．248）μg／ml，均低于Huh7．5．1／ADM细胞（均P＜0．05）。Huh7．5．1／ADM细胞中CD133的表达率为（76．06±2．948）％，与亲本Huh7．5．1细胞[（25．38±4．349）％]和Huh7．5．1／ADM／SIS3细胞[（48．49±2．304）％]比较，差异均有统计学意义（均P＜0．05）。 SIS3抑制Smad3活性后，降低了克隆集落形成能力和体内裸鼠成瘤能力。结论 SIS3作为Smad3信号通路的特异性抑制剂，与多药耐药肝癌细胞的干性作用有关。Objective To investigate whether SIS3, a specific inhibitor of Smad3 phosphorylation, can reverse the stemness of multidrug-resistant （ MDR ） hepatocellular carcinoma cells. Methods MDR HCC Huh7. 5. 1/ADM cell lines were developed by exposing parental cells to stepwise increasing concentrations of ADM. CCK-8 assay was used to determine the cellular sensitivity of various anticancer drugs. Flow cytometry （ FCM） was used to analyze the expression level of cancer stem cell marker CD133. Clone formation assay and mouse subcutaneous xenograft tumors were used to investigate the tumorigenicity in vitro and in vivo. Western blotting （ WB） was used to analyze the changes of expressions of CD133, Smad3, Bcl-2, Bax and p-Smad3 in different conditions. Results ADM treatment of HCC cells in vitro resulted in a development of subline, Huh7. 5. 1/ADM cells, with CSC phenotypes： stable MDR phenotype （ besides ADMc Huh7.5.1/ADM cells were also more resistant to some other anticancer drugs including VCR, MMC and CTX ） （IC50：0.215±0.018 vs. 0.123± 0.004, 0.145±0.009 vs. 0.014±0.002, 1.021± 0.119 vs. 0.071± 0.006, 27.007±1.606 vs. 1.919±0.032）（unit： μg/ml）（P〈0.05）. Huh7.5.1/ADM cells enriched the cancer stem-like cell fraction （CD133-positive subpopulation） （76.06±2.948% vs. 25.38±4.349%）（P〈0.05） , had stronger tumorigenicity in vivo and colony formation ability, and activated the Smad3 activity. Inhibition of Smad3 activity by SIS3 decreased stemness of the Huh7. 5. 1/ADM cells： CD133-positive subpopulation （48.49±2.304% vs. 76.06±2.948%）（P〈0.05）; ADM IC50： （0.112±0.019 vs. 0.215± 0.018）, VCR IC50（0.065±0.013 vs. 0.145±0.009）, MMC IC50（0.749±0.121 vs. 1.021±0.119）, CTX IC50 （10.576±1.248 vs. 27.007±1.606）（unit：μg/ml）（P〈0.05）, and decreased tumorigenicity and colony formation ability. Conclusion SIS3 as a specific inhibitor of Smad3 signal is involved in the stemness of 〈br〉 multidrug resistant hepatocellular carcin

关 键 词：肝肿瘤 肿瘤干细胞 抗药性 肿瘤 SIS3 CD133 

分 类 号：R735.7[医药卫生—肿瘤]