嵌合体真核表达质粒pVAX1-SPG的构建及表达研究  

Construction and expression of recombinant eukaryotic plasmid pVAX1-SPG

作　　者：王怡丹[1,2] 孙天瞳[3] 刘建国[3,2] 柴巧学[3] 曲云鹏[3] 于晓光[3] 白国辉[3,2] 田源[3,2] 韩琪[3] 

机构地区：[1]遵义市第一人民医院口腔科,贵州遵义563002 [2]贵州省高等学校口腔疾病研究特色重点实验室遵义市口腔疾病研究重点实验室,贵州遵义563099 [3]遵义医学院口腔医学院口腔内科学教研室,贵州遵义563099

出　　处：《牙体牙髓牙周病学杂志》2015年第11期645-650,共6页Chinese Journal of Conservative Dentistry

基　　金：贵州省科技创新人才团队建设项目[黔科合人才团队(2013)4026];贵州省高等学校重点学科建设项目(SZXK-201207-04);省市科技合作专项资金项目[省市科合(2014)41号];贵州省高等学校特色重点实验室建设项目[黔教合KY字(2013)109]

摘　　要：目的:构建含变异链球菌表面蛋白Spa P的P区编码基因spap-P和葡聚糖结合蛋白Gbp A的葡聚糖结合区编码基因gbd的嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG,并观察其在哺乳动物细胞293T中的表达。方法:通过基因工程技术构建嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG,并采用脂质体转染法将其转染至293T细胞中;然后分别采用免疫组化SABC法和Western-blot检测嵌合蛋白Spa P/P-GBD在真核细胞中的表达。结果:重组真核表达质粒p VAX1-SPG经酶切、测序鉴定证实,其所携带的外源基因片段为2.4 kb的目的基因片段,序列同源性为99%;免疫组化染色结果显示,经p VAX1-SPG转染的293T细胞胞质呈棕褐色染色;Western-blot检测结果显示,分子量为72 k Da的嵌合蛋白Spa P/P-GBD能够被正确表达。结论:构建成功的嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG能在真核细胞293T中正确表达目的蛋白。AIM： ： To construct the eukaryotic plasmid including surface protein antigen（ Spa P） P domain（ Spa P-P） and glucan binding domain（ GBD） of glucan binding protein A（ Gbp A） of Streptococcus mutans,and to observe the expression of recombinant plasmid p VAX1- SPG in mammalian cells 293 T. METHODS： The eukaryotic plasmid p VAX1- SPG carrying encoding gene of GBD of Gbp A and Spa P-P of Spa P of Streptococcus mutans was constructed by recombinant DNA technology. The eukaryotic plasmid was transfected into 293 T cells by lipofectamine reagent. The transient expression of the protein in 293 T cells was detected by immunochemistry technique and Western-blot. RESULTS： The recombinant plasmidp VAX1-SPG was obtained and identified by restriction endonuclease analysis. Immunohistological staining showed that positive expression of Spa P / P- GBD was detected in the plasma of 293 T cells transfected with recombinant plasmid p VAX1- SPG. Western- blot confirmed the expression of the fusion protein Spa P / P-GBD in 293 T cells. CONCLUSION： The eukaryotic plasmid p VAX1- SPG can be constructed. The target protein Spa P / P- GBD can be expressed correctively in 293 T cells.

关 键 词：变异链球菌 表面蛋白抗原 葡聚糖结合蛋白 哺乳动物细胞 真核表达 

分 类 号：R780.2[医药卫生—口腔医学]