重组pCMV-N-Tudor-SN点突变质粒的构建及表达  

Construction and expression of recombinant p CMV-N-Tudor-SN.Mutants Flag plasmids

作　　者：杨文栋[1] 苏超[2] 张春燕[3] 赵亚丽[1] 任媛媛[3] 高星杰[2] 杨洁[1,2] 何津岩[1] 

机构地区：[1]天津医科大学细胞生物学系,天津300070 [2]天津医科大学基础医学研究中心,天津300070 [3]天津医科大学医学生物化学与分子生物学系,天津300070

出　　处：《天津医科大学学报》2016年第1期5-8,共4页Journal of Tianjin Medical University

基　　金：国家杰出青年基金资助项目(31125012);教育部"创新团队发展计划"(IRT13085);国家自然科学基金资助项目(31170830;31370749;31571380);天津市应用基础与前沿技术研究计划(青年基金项目)(15JCQNJC09900)

摘　　要：目的:构建Tudor-SN蛋白的Serine426(S426)、Serine781(S781)、Threonine240(T240)和Threonine429(T429)的点突变质粒,并使该重组质粒能够在He La细胞中融合表达。方法:利用定点突变技术,对Tudor-SN蛋白进行S426A、S781A、T240A、T429A点突变,通过双酶切的方法获得Tudor-SN.Mutants片段,最后将其连入到p CMV-N-Flag载体中。在He La细胞中转染该质粒,利用Western blot技术检测质粒表达效率。结果:(1)重组质粒经双酶切鉴定,可以观察到载体与Tudor-SN.Mutants的条带。(2)转染突变质粒后可看出He La细胞中有Flag蛋白表达。结论:质粒构建成功,可以用于下一步科学研究使用。Objective： To construct eukaryotic Flag expressing recombinant pCMV-N-Tudor-SN.Mutants-Flag. Methods：The Serine426 （S426）, Serine781 （S781）, Threonine240（T240）and Threonineg29（T429） of Tudor-SN were transformed into Alanine by site- directed mutagenesis technique. Then the Tudor-SN.Mutants were obtained by restricting double enzyme digestion, and then inserted into pCMV- N-Flag vector. The recombinant plasmids were transfected into HeLa and observed by Western blot. Results： （ 1 ） The vector and Tudor-SN. Mutants could be observed by restricting double enzyme digestion. （2） Flag was expressed by HeLa which was transfected with recombinant plasmid. Conclusion：The recombinant plasmids of pCMV-N-Tudor-SN.Mutants-Flag are constructed successfully, and may be useful for further study.

关 键 词：人类Tudor-SN蛋白 pCMV-N-Flag 重组质粒 融合蛋白 

分 类 号：Q7[生物学—分子生物学]