转染hTERT基因对人角膜内皮细胞增殖及功能维持的影响  

作　　者：刘志平[1] 沙翔垠[1] 王智崇[2] 庄菁[2] 

机构地区：[1]广州医科大学附属第二医院眼科,广州510260 [2]中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室,广州510060

出　　处：《广东医学》2016年第7期965-969,共5页Guangdong Medical Journal

基　　金：国家自然青年科学基金资助项目(编号:81300732);广东省医学科研基金立项课题(编号:B2013305);广东省自然科学基金面上项目(编号:2014A030313487)

摘　　要：目的探索转染人端粒酶催化亚单位(TERT)促进人角膜内皮细胞(HCECs)增殖并进行长期培养的可行性。方法原代HCECs生长到80%融合时,采用脂质体介导的方法将质粒p EGFP-N1和p BABE-puroh TERT转染到HCECs,1μg/m L嘌呤霉素筛选。RT-PCR和Western blot检测嘌呤霉素耐药克隆中TERT的表达情况。阳性克隆进行传代培养。MTT法和细胞周期检测比较细胞的生长增殖能力;透射电镜检测细胞的超微结构,RT-PCR检测泵功能相关基因的表达,Western blot检测Na+/K+-ATPaseα1的表达,免疫荧光检测ZO-1、N-cadherin的表达。结果 TERT-HCECs表达了外源的TERT已经传到36代,保持了正常的HCECs形态且比HCECs具有更强的增殖能力;泵功能相关基因、Na+/K+ATPaseα1、ZO-1的表达在TERT-HCECs和HCECs中差异无统计学意义。TERT-HCECs能形成单层结构,并保持与原代HCECs细胞相似的泵功能。结论通过转染TERT,建立了一株与原代生理功能相近且具有更强增殖能力的TERT-HCECs。

关 键 词：人角膜内皮细胞 端粒酶 端粒酶催化亚基 增殖 组织工程角膜 

分 类 号：R733.7[医药卫生—肿瘤]