n-3多不饱和脂肪酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的激活作用及其机制  

Effects and mechanisms of n-3 polyunsaturated fatty acids on large conductance Ca2＋-activated K＋ channels in normal rat coronary smooth muscle cells

作　　者：汤徐 季圆[1] 钱玲玲[1] 党时鹏[1] 孙曼青[1] 王湘芸[1] 吴莹[1] 夏大云[1] 王文[2] 柴强[3] 王如兴[1] 

机构地区：[1]南京医科大学附属无锡人民医院心内科,214023 [2]徐州医学院药理学系 [3]山东省医学科学院基础医学研究所心血管病研究室

出　　处：《中华心律失常学杂志》2016年第2期154-159,共6页Chinese Journal of Cardiac Arrhythmias

基　　金：国家自然科学基金（81070157,81370303）;江苏省自然科学基金（BK2011179,SBK201222073）;江苏省人事厅“六大人才高峰”第七批高层次项目（006）;江苏省医学重点人才资助项目（RC201134）

摘　　要：目的探讨n-3多不饱和脂肪酸（n-3PUFA）对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BK通道）激活作用及其机制。方法酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞，采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术分别记录不同浓度二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）灌流后BK通道开放概率（NP0）。采用Western Blot和qRT-PCR分别测定未灌胃组和低、高剂量n-3 PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道α亚单位和β1亚单位基因及蛋白表达。结果在电极外液钙离子浓度为1μmoVL和刺激电压60mV条件下，EPA浓度为0、10、30、100、300和1000pmo/L时，BK通道NP0分别为0．0616±0．0938、0．1090±0．0957．0．1303±0．0964、0．2250±0．1804、0．3803±0．2472和0．4080±0．2705，呈浓度依赖性增加（P〈0．05，n=4）；而DHA浓度为0、0．01、0．1和1μmol/L时，BK通道NP0分别为0．1200±0．0086、0．1190±0．0734、0．1250±0．0921和0．2890±0．0616，NP。无明显增加（P〉0．05）；继续增加DHA的浓度，当DHA浓度为3、5、7．5和10μmol／L时，BK通道NP。分别为0．6326±0．0478、1．0980±0．0643、1．1587±0．0676和1．1640±0．0926呈浓度依赖性增加（P〈0．05，n=4）。BK通道仪亚单位蛋白表达分别为0．7929±0．1794、0．7760±0．0599和0．7905±0．0596（P〉0．05，n=24），β1亚单位蛋白表达分别为0．8971±0．2976、1．1407±0．1516和1．2392±0．2337（P〉0．05，n=24）。未灌胃组和低、高剂量n-3PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞上BK通道α亚单位基因表达分别为0．6403±0．2470、0．6301±0．2290和0．9217±0．0907（P〉0．05，n=24），B1亚单位基因表达分别为0．8531±0．3687、0．9919±0．2250和1．0865±0．3632（P〉0．05，n=24）。结论n-3PUFA并非通过影响BK通道亚单位表达增加BK通道激活，而是通过与BK通道作用后直接激活，从而扩张冠状动脉。Objective To investigate the effects and mechanisms of n-3 polyunsaturated fatty acids （n-3 PUFA）on large conductance Ca2±-activated K±channels（ BK channels）in normal coronary smooth muscle cells（SMCs） .Methods Normal SMCs were isolated by enzyme digestion. The BK currents with different concentrations of eicosapentaenoic acid （ EPA ） and docosahexenoic acid （ DHA ） were recorded by single channel patch-clamp technique. The gene and protein expressions of α subunit and β1 subunit of BK channels in coronary SMCs from normal control group, low and high doses of n-3 PUFA groups were measured by using qRT-PCR and Western Blot. Results At test potential 60 mV, 1 μmol/L calcium, the open probabilities （NP0）of BK channels were 0. 061 6±0. 093 8,0. 109 0±0. 095 7,0. 130 3±0. 096 4,0. 225 0±0. 180 4, 0. 380 3±0. 247 2 and 0. 408 0± 0. 270 5 with perfusate of 0, 10,30,100,300 and 1 000 pmol/L EPA （P〈 0.05,n=4）.The NP0 of BK channels were 0. 120 0±0.008 6,0. 119 0±0.073 4,0. 125 0±0.092 1 and 0. 289 0±0. 061 6 at 0,0. 01,0. 1 and 1 μmol/L DHA respectively,and DHA failed to activate BK channels （P〉0. 05）.In concentrations above 1 μmol/L, DHA activated BK channels in a dose-dependent manner.The NP0 were 0. 632 6±0. 047 8,1. 098 0±0. 064 3,1. 158 7±0. 067 6 and 1. 164 0±0. 092 6 at 3,5,7.5 and 10 μmol/L DHA （ P 〈 0. 05, n = 4）. The protein expressions of α and β1 subunits were 0. 792 9 ± 0. 179 4, 0. 776 0±0. 059 9,0. 790 5±0. 059 6（P〉0. 05,n= 24） ,and 0. 897 1±0. 297 6,1. 140 7±0. 151 6, 1. 239 2± 0. 233 7（P〉0.05,n=24）.The gene expressions of α subunit were 0. 640 3±0. 247 0,0. 630 1±0. 229 0 and 0. 921 7±0. 090 7（P〉0. 05,n = 24）, and those of β1 subunit were 0. 853 1 ±0. 368 7,0. 991 9±0. 225 0 and 1. 086 5±0. 363 2 （P〉0. 05, n = 24）.Conclusions n-3 PUFA can directly activate BK channels and dilate the coronary arteries, no increasing in subunit expression of BK channels.

关 键 词：N-3多不饱和脂肪酸 冠状动脉 大电导钙激活钾通道 单通道 膜片钳 

分 类 号：R331[医药卫生—人体生理学]