地昔帕明逆转人脑胶质瘤耐药细胞U251/TR对替莫唑胺的耐药作用（英文）  

Reversal effects of desipramine on resistance of U251/TR cells to temozolomide

作　　者：马健[1] 杨艳茹[1] 刘景景[1] 李芳芳[1] 陈美华[1] 王浩[1] 王蕾[1] 孙立立[1] 王凤泽[2] 王德才[1] 张汉霆[1,3] 

机构地区：[1]泰山医学院药理学研究所 [2]泰山医学院生命科学学院,山东泰安271016 [3]Departments of Behavioral Medicine & Psychiatry and Physiology & Pharmacology,West Virginia University College of Medicine

出　　处：《中国药理学与毒理学杂志》2016年第6期620-626,607,共7页Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology

基　　金：国家自然科学基金项目(81302202);国家自然科学基金项目(81272683);国家自然科学基金项目(81441111);山东省自然科学基金项目(ZR2011HQ055);山东省政府"泰山学者海外特聘专家"专项基金~~

摘　　要：目的探讨抗抑郁药地昔帕明(DMI)对人脑胶质瘤耐药细胞(U251/TR)对替莫唑胺(TMZ)耐药作用的影响及其机制。方法 DMI 20~80μmol·L^(-1)或TMZ 0.5~10 mmol·L^(-1)处理U251/TR细胞24 h,用CCK-8法测定DMI和TMZ对U251/TR细胞增殖抑制的半数有效量(IC50)。CCK-8检测TMZ(1和2 mmol·L^(-1))和DMI(20,30和40μmol·L^(-1))联合或单独处理U251/TR细胞24 h对细胞增殖抑制的影响,用金正均法计算Q值来评价两种药物的协同效应。TMZ(1 mmol·L^(-1))和DMI(30μmol·L^(-1))联合或单独处理U251/TR细胞24 h,以Hoechst33258染色观察细胞核形态,发光法检测胱天蛋白酶3活性;实时定量PCR和Western蛋白印迹法检测C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达;小干扰RNA(si RNA)沉默CHOP的表达后,观察TMZ(1 mmol·L^(-1))和DMI(30μmol·L^(-1))联合给药对U251/TR增殖抑制的影响。结果 DMI或TMZ单用对U251/TR细胞增殖均有明显的抑制作用,并且呈浓度依赖性(r2=0.983,0.982,P<0.05),IC50分别为(33.6±0.5)μmol·L^(-1)和(2.5±0.6)mmol·L^(-1)。TMZ(1和2 mmol·L^(-1))和DMI(20,30和40μmol·L^(-1))联合给药能24 h对U251/TR细胞的增殖抑制率明显强于单独给药,以金正均法计算联合给药的Q值均>1.15,证实TMZ和DMI联合给药具有协同效应。同时,DMI 30μmol·L^(-1)和TMZ 1 mmol·L^(-1)联和应用可诱导U251/TR细胞凋亡,主要表现为细胞核固缩、染色质沉积和胱天蛋白酶3的激活。这种凋亡诱导作用明显好于单独给药的效果(P<0.05)。DMI和TMZ联合应用能显著激活细胞内质网应激标志蛋白CHOP的表达(P<0.05)。以si RNA沉默CHOP表达后,DMI逆转TMZ耐药的作用明显减弱,联合给药组细胞生存率由51.8%升至62.2%(P<0.05)。结论 DMI能逆转人脑胶质瘤细胞U251/TR对TMZ的耐药性,其机制可能与激活CHOP表达有关。OBJECTIVE To examine the reversal effect of desipramine （DMI） on resistance to temozolomide（TMZ） in U251/TR cells and explore its mechanism. METHODS U251/TR cells were exposed to DMI （20-80 μmol·L^-1） or TMZ （0.5-10 mmol·L^-1） for 24 h, cell viability was determined by cell counting kit-8 assay with IC,o calculated. The cytotoxicity of U251/TR cells treated with TMZ （1 or 2 retool-L-1） in combination with DMI （20, 30 or 40 μmol· L^-1） for 24 h was detected using CCK-8 assay. Synergism between DMI and TMZ was analyzed by the JIN Zheng-jun method. Apoptosis of U251/TR cells induced by TMZ 1 mmol. L-1, DMI 30 μmol· L^-1,or their combination was examined by Hoechst33258 stains and caspase 3 activity was detected by luminescence analysis. Expression of C/EBP homologous protein （CHOP） was measured using quantitative real-time PCR and Western blotting. The survival rate of U251/TR cells treated with TMZ 1 mmol· L^-1 and/or DMI 30 μmol· L^-1 was also assessed after silencing CHOP expression by small interference RNA （siRNA）. RESULTS DMI or TMZ alone inhibited the growth of U251/TR cells significantly in a concentration-dependent manner （r 2=0.983,0.982,P〈0.05）, with the IC50 （33.6± 0.5）μmol· L^-1 and （2.5 _ 0.6）mmol· L^-1, respectively. The cell viability inhibitory rate of U251/TR cells by TMZ （1 or 2 mmol· L^-1） combined with DMI （20, 30, or 40 μmol· L^-1） was greater than that by TMZ or DMI alone （P〈0.05）. The JIN Zheng-jun analysis revealed that combination of DMI and TMZ produced synergistic cytotoxicity （Q〉1.15）, ie, compared with TMZ alone, TMZ （1 mmol· L^-1） combined with DMI （30 μmol · L^-1） produced significant nuclear fragmentation and condensation （P〈 0.05）. In addition, DMI and TMZ in combination activated caspase 3 activity in U251/TR cells （P〈0.05）. Knock- down of CHOP by specific siRNA attenuated the synergistic effect of DMI in the presence of-I-MZ, the survival rate of the combined drug group raised

关 键 词：脑胶质瘤 地昔帕明 替莫唑胺 逆转耐药 C/EBP同源蛋白 

分 类 号：R739.41[医药卫生—肿瘤]