H_2O_2对体外培养的视网膜色素上皮细胞活性、细胞周期、细胞中铁及铁调素浓度的影响  

Effects of H_2O_2 on cell activity,cell cycle,iron and hepcidin levels of retinal pigment epithelial cells in vitro

作　　者：刘明[1] 龙潭[1] 崔丽珺[2] 陈丽[2] 

机构地区：[1]西安市第一医院眼科,陕西省西安市710001 [2]西安交通大学医学院第一附属医院眼科,陕西省西安市710061

出　　处：《眼科新进展》2016年第8期705-708,共4页Recent Advances in Ophthalmology

基　　金：国家自然科学基金资助(编号:81300765);陕西省社会发展科技攻关项目(编号:2016SF-257;2012K16-11-01)~~

摘　　要：目的观察H_2O_2对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞中铁及铁调素浓度的影响。方法将人RPE细胞(ARPE-19细胞)分为正常对照组、75μm·L^(- 1)H_2O_2的氧化损伤组,培养0 h、3 h、6 h、9 h及12 h后,用MTT法检测细胞的增殖活性、流式细胞仪检测细胞周期的变化、铁测试盒测定细胞内总铁浓度的变化、铁调素Elisa试剂盒测定铁调素的变化。结果细胞活性分析发现H_2O_2可以抑制RPE细胞的增殖。氧化损伤组随着时间的延长,细胞的增殖活性明显下降。H_2O_2作用0 h、3 h、6 h、9 h、12 h细胞的凋亡率分别(4.83±1.20)%、(5.09±1.39)%、(5.89±1.87)%、(20.01±2.34)%、33.28±1.90%;H_2O_2作用3 h细胞的凋亡率与0 h比较差异无统计学意义(P>0.05),作用6 h、9 h及12 h与0 h比较差异均有统计学意义(均为P<0.05);H_2O_2作用3 h,G1期细胞明显多于G2+S期细胞,随着作用时间的延长,G1期细胞逐渐下降,至作用12 h后G2+S期细胞明显多于G1期细胞。H_2O_2作用0 h、3 h、6 h、9 h、12 h细胞内铁调素的浓度分别为(73.18±0.05)ng·mg^(- 1)、(57.83±4.99)ng·mg^(- 1)、(28.42±1.89)ng·mg^(- 1)、(18.13±0.21)ng·mg^(- 1)、(20.77±0.29)ng·mg^(- 1),6 h、9 h、12 h与0 h组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05);H_2O_2作用0 h、3 h、6 h、9 h、12 h细胞内总铁浓度分别为(0.78±0.01)mg·g^(- 1)、(1.43±0.10)mg·g^(- 1)、(0.78±0.02)mg·g^(- 1)、(0.52±0.03)mg·g^(- 1)、(0.57±0.02)mg·g^(- 1),作用3 h、9 h、12 h与0 h比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论随着H_2O_2作用时间的延长,细胞凋亡率增加;细胞内总铁浓度先增加再降低;细胞内铁调素的浓度明显降低。H_2O_2可以通过打破细胞内铁的平衡起到氧化应激损伤作用。Objective To investigate the effects of H2O2 on cell activity,cell cycle,iron and hepcidin levels of retinal pigment epithelial（ R PE） cells in vitro. Methods AR PE-19 cells were cultured conventionally and divided into control group and 75 μmol·L（- 1）H2O2 group. The cell viabilities were tested by MTT. The cell cycles and cell apoptosis were tested by flow cytometry.The concentrations of hepcidin were tested by ELISA. The concentrations of total iron in cells were tested by iron checkerboard. Results H2O2 could significantly decrease the R PE cell activity in time-dependent manner. After cultivated with H2O2 for 0 hour,3 hours,6 hours,9 hours and 12 hours,the cell apoptotic rates were（ 4. 83 ± 1. 20） %,（ 5. 09 ± 1. 39） %,（ 5. 89 ± 1.87） %,（ 20. 01 ± 2. 34） %,（ 33. 28 ± 1. 90） %,respectively,there was no statistical difference betw een 0 hour and 3 hours（ P 0. 05）,but there were statistical differences betw een 6 hours,9hours,12 hours and 0 hour（ all P 0. 05）. After cultured with H2O2 for 3 hours,the proportion of cells in G1 phase was higher than that of cells in G2 ＋ S phase,with the time prolong,the proportion of cells in G1 phase gradually decreased,when cultured for 12 hours,the proportion of cells in G2 ＋ S phase was higher than that of cells in G1 phase. After cultivated with H2O2 for 0hour,3 hours,6 hours,9 hours and 12 hours,the concentrations of hepcidin in cells were（ 73. 18± 0. 05） ng·mg（- 1）,（ 57. 83 ± 4. 99） ng·mg（- 1）,（ 28. 42 ± 1. 89） ng·mg（- 1）,（ 18. 13 ± 0. 21） ng·mg（- 1）,（ 20. 77 ± 0. 29） ng ·mg（- 1）,respectively,there were statistical differences between 6hours,9 hours,12 hours and 0 hour（ all P 0. 05）; Total iron concentrations in cells were（ 0.78 ± 0. 01） mg·g（- 1）,（ 1. 43 ± 0. 10） mg·g（- 1）,（ 0. 78 ± 0. 02） mg·g（- 1）,（ 0. 52 ± 0. 03） mg·g（- 1）,（ 0. 57 ± 0. 02） mg·g（- 1）,respectively,there were statistical differences between 3 hours,9hours

关 键 词：铁调素 铁 年龄相关性黄斑变性 过氧化氢 

分 类 号：R774.1[医药卫生—眼科]