胚胎来源hBM—MSCs对大鼠外周血单个核细胞及脑梗死区TNF-a的免疫抑制作用研究  

Immune-suppression effect of fetal-originated human bone marrow mesenchymal stem cells on peripheral blood mononuclear cells in vitro and tumor necrosis factor-o~ expression at cerebralinfarct site in vivo in rats

作　　者：赵春松[1] 邹海强[2] 谢璇[3] 陈凌[4] 王佳茵[1] 关云谦[1] 张愚[1] 

机构地区：[1]首都医科大学宣武医院细胞生物室,北京100053 [2]广州军区广州总医院神经内科,广州510010 [3]中山大学生命科学大学院,广州510275 [4]首都医科大学宣武医院神经外科,北京100053

出　　处：《中华神经医学杂志》2016年第8期770-777,共8页Chinese Journal of Neuromedicine

基　　金：（1）基金项目：北京市自然科学基金（7102078）（2）基金项目：北京市科委健康培育项目（Z111107067311033）（3）基金项目：北京市科技新星项目（2009822）（4）基金项目：北京市教育委员会科技计划重点项目（KZ201310025024）

摘　　要：目的观察胚胎来源人骨髓间充质干细胞（hBM-MSCs）能否抑制体外培养的大鼠外周血单个核细胞（PBMCs）增殖和炎症因子表达，探讨哪些人源性促炎因子可以诱导hBM-MSCs发挥免疫抑制作用，并观察hBM-MSCs对脑梗死模型大鼠梗死区肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA和蛋白表达的影响。方法将提取的hBM-MSCs和大鼠PBMCs进行共培养，并以在培养基中添加10 μg/mL刀豆蛋白A（ConA）方式激活大鼠PBMCs。（1）实验主要包括hBM-MSCs＋PBMCs组、hBM-MSCs＋PBMCs＋ConA组、PBMCs组、hBM-MSCs组，采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况。（2）实验主要包括hBM-MSCs＋PBMCs＋ConA组、PBMCs＋ConA组，采用ELISA法检测培养液中TNF-α、干扰素-γ （IFN-γ）、白介素-10 （IL-10）的表达水平。（3）实验分为hBM-MSCs＋PBMCs （IFN-γ＋IL-1α）组、hBM-MSCs＋PBMCs （IFN-γ＋IL-1β）组、hBM-MSCs＋PBMCs （IFN-γ＋TNF-α）组、hBM-MSCs＋PBMCs组，采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况。（4）SD大鼠30只按随机数字表法分为假手术组、对照组（脑缺血后尾静脉给予生理盐水）和hBM-MSCs组（脑缺血后尾静脉给予hBM-MSCs），每组10只。术后3 d取材，采用RT-PCR、Western blotting检测脑梗死区TNF-α mRNA和蛋白表达。结果（1）与PBMCs组、hBM-MSCs组相比，hBM-MSCs＋PBMCs组吸光度值均显著升高，差异均有统计学意义（P〈0.05）。与hBM-MSCs＋PBMCs组相比，hBM-MSCs＋PBMCs＋ ConA组吸光度值明显下降，差异有统计学意义（P〈0.05）。（2）与PBMCs＋ConA组TNF-α、IFN-γ[（1030± 196） pg/mL、（2880±250） pg/mL]比较，hBM-MSCs＋PBMCs＋ConA组TNF-α、IFN-γ表达[（160±10） pg/mL、（240±55） pg/mL]明显降低，IL-10表达[（330±45） pg/mL vs. （750±110） pg/mL]明显升高，差异均有统计学意义（P〈0.05）。（3）hBM-MSCs＋PBMCs （IFN-γ＋IL-1α）组、hBM-MSCs＋PBMCs（IFN-γ＋ IL-1β）组、hBM-MSCs＋PBMCs （IFN-γ＋TNF-�Objective To investigate whether human bone marrow mesenchymal stem cells （hBC-MSCs） have the immune-suppression ability on the proliferation of peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） and their pro-inflammatory cytokine production in rats, to explore what kinds of human cytokines are required for the induction of hBM-MSCs to become immune-suppressive, and to observe the effect of intravenous delivery of hBM-MSCs on tumor necrosis factor （TNF）-a transcription and expression in the core infarct areas of rats after cerebral ischemia. Methods The fetal-originated hBC-MSCs and rat PBMCs were extracted; the rat PBMCs were activated by adding 10 μg/mL concanavalin A （ConA）. （1） The first experiment was divided into hBM-MSCs＋PBMCs group, hBM-MSCs＋PBMCs＋ConA group, PBMCs group and hBM-MSCs group; CCK-8 assay was employed to detect the proliferation of these cells. （2） The second experiment was divided into hBM-MSCs＋PBMCs＋ConA group, PBMCs＋ConA group; ELISA was used to detect the TNF-a, interferon-Y（IFN-7） and interleukin （IL）-10 expressions. （3） The third experiment was divided into hBM-MSCs＋PBMCs （IFN-Y＋IL-la） group, hBM-MSCs＋PBMCs （IFN-Y＋IL-1β） group, hBM-MSCs＋PBMCs （IFN-Y＋TNF-a） group and hBM-MSCs＋PBMCs group; CCK-8 assay was used to detect the proliferation of these cells. （4） Thirty SD rats were randomly divided sham-operated group, control group （giving normal saline after ischemia） and hBM-MSCs group （giving hBM-MSCs after ischemia, n=10）; on the third d of ischemia, the TNF-a mR_NA and protein expressions at the infarct areas was detected by real time PCR and Western blotting, respectively. Results （1） The optical density （OD） in the hBM-MSCs＋PBMCs group was significantly increased as compared with that in the PBMCs group and hBM-MSCs group （P〈0.05）; OD in the hBM-MSCs＋PBMCs group was significantly increased as compared with that in the hBM-MSCs＋PBMCs＋ConA group （P〈0.05）. （2） The TNF-a, IFN-Y

关 键 词：脑梗死 人骨髓间充质干细胞 单个核细胞 炎症因子 免疫抑制 

分 类 号：R743.3[医药卫生—神经病学与精神病学]