重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6(E)对耐顺铂卵巢癌细胞增殖与侵袭转移的影响  

Inhibitory effects of recombinant fusion protein TAT-OSBP-MKK6(E) on the proliferation and metastasis of cisplatin-resistant human epithelial ovarian cancer

作　　者：尹书琴[1] 康佳丽[1] 袁金[1] 杨英[1] 帅蓉[1] 

机构地区：[1]广州医科大学附属广州市第一人民医院妇产科,广州510180

出　　处：《临床肿瘤学杂志》2016年第8期673-679,共7页Chinese Clinical Oncology

摘　　要：目的观察重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6(E)对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞株SKOV3/DDP增殖及侵袭转移的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SKOV3/DDP细胞经融合蛋白处理后的增殖抑制率及采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后融合蛋白对DDP敏感性的影响,单丹磺酰尸胺染色法检测融合蛋白诱导的自噬情况,QPCR和Western blotting检测SKOV3/DDP细胞Beclin 1的表达情况,Transwell体外迁移和重组基底侵袭实验研究融合蛋白对SKOV3/DDP细胞的侵袭和迁移能力。结果 DDP对SKOV3/DDP细胞的半数抑制浓度(IC_(50))为(37.62±2.63)μg/ml,10、20、40μg/ml融合蛋白作用后,DDP的IC_(50)分别降低至(17.07±0.88)、(11.08±0.57)和(1.96±0.31)μg/ml(P<0.001);以3-MA抑制细胞自噬,可阻断融合蛋白诱导SKOV3/DDP细胞对DDP的敏感性;SKOV3/DDP自噬情况的比较:融合蛋白组、融合蛋白+3-MA组的荧光强度分别为824±107、459±128,均高于对照组的306±143,差异有统计学意义(P<0.05)。Beclin 1 mRNA和蛋白的表达水平随融合蛋白的浓度增加(10、20、40μg/ml),其表达水平升高,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、DDP组、融合蛋白组和DDP+融合蛋白组中SKOV3/DDP细胞的Beclin 1蛋白表达亦不同,差异有统计学意义(P<0.05),其中DDP+融合蛋白组蛋白表达量最高,为0.876±0.023,其次为融合蛋白组的0.564±0.021。融合蛋白能明显抑制SKOV3/DDP细胞的侵袭和迁移能力,DDP+融合蛋白组和融合蛋白组分别与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),DDP组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论融合蛋白可抑制SKOV3/DDP细胞的增殖、侵袭和转移,可能与诱导自噬及上调Beclin 1的表达有关。Objective To investigate the effect of recombinant fusion protein TAT-OSBP-MKK6（E） on the proliferation, in- vasion and metastasis of cisplatin（DDP）-resistant human epithelial ovarian cancer cell SKOV3/DDP. Methods MTT assay was used to analyze the influence of TAT-OSBP-MKK6（E） alone or in combination with a autophagy inhibitor 3-methyladenine （3-MA） on the sensitivity of DDP in SKOV3/DDP cells.The autophagy level was observed by monodansylcadaverin staining. The mRNA and protein expression levels of Beclin 1 were evaluated by QPCR and Western blotting after challenge with fusion protein. The abilities of invasion and migration were evaluated by Transwell assay. Results The half-inhibition concentration（IC50） of SKOV3/DDP cells was（ 37.62± 2. 63）μg/ml. After being exposure to 10, 20 and 40 μg/ml fusion protein, the ICs0 of SKOV3/DDP cells was decreased to（ 17.07± 0. 88）, （ 11.08 ±0. 57） and（ 1.96±0. 31 ） μg/ml, respectively （P〈0. 001 ）. The inhibition of autophagy by 3-MA abolished the sensi- tivity of SKOV3/DDP cells to DDP induced by TAT-OSBP-MKK6 （E）. The autophagy fluorescence of SKOV3/DDP in the group of TAT-OSBP-MKK6 （E） and TAT-OSBP-MKK6 （E） plus 3-MA were 824± 107 and 459± 128, higher than 306± 143 of control group （ P〈 0. 05）. The mRNA and protein expression levels of Beclin 1 elevated with the increase of TAT-OSBP-MKK6 （E） concentration （ 10,20, 40 μg/nll） , and the differences between each concentration group and control group were statistically significant （P〈0. 01 ）. The expression of Beclin 1 protein in SKOV3/DDP cells was also different among control group, TAT-OSBP-MKK6 （E） group and DDP plus TAT-OSBP-MKK6（E） group（P〈0. 05）. The expression of Belinl protein were the highest in the TAT-OSBP-MKK6（E） plus DDP group（ 0. 876 ± 0. 023 ） followed by that of TAT-OSBP-MKK6 （ E ） group （ 0. 564 ± 0. 021 ）. Cell migration and invasion assay showed that TAT-OSBP-MKK6（E） could inhibit the in

关 键 词：卵巢癌 重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6(E) 细胞自噬 侵袭 迁移 细胞耐药 

分 类 号：R737.31[医药卫生—肿瘤]