热休克人羊膜间充质干细胞提取物与杀伤细胞共培养及抑瘤效应评价  

The co-culture of CIK cells with heat-shock hAMSCs′extract and the evaluation of anti-tumor effection

作　　者：李培义[1] 李宁[1] 王雪[1] 张川骎 李菲[1] 罗清[1] 

机构地区：[1]遵义医学院附属医院胸部肿瘤科,贵州遵义563000

出　　处：《重庆医学》2016年第29期4033-4035,4040,共4页Chongqing medicine

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81260397);贵州省科技厅科学技术基金资助项目(黔科合J字[2013]2331号);遵义市科技局省-市联合项目基金资助项目[遵科合人(2014)9号];贵州省教育厅高校优秀科技创新人才支持计划基金资助项目(黔教合KY字[2015]495);遵义医学院博士启动基金资助项目[(0060616)F-616]

摘　　要：[摘要]目的将热休克人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）提取物与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共培养，以期提高早期CIK的增殖、分泌细胞因子及体外杀伤等能力，为得到高质量CIK提供研究基础。方法（1）从外周血单个核细胞中常规诱导培养CIK；（2）热休克处理hAMSCs（42℃，1h），48h后收集上清液及胞内物质，将提取物与第10天CIK（370μg：2×106个）共培养；（3）计数第12、14、17天CIK细胞数，绘制生长曲线；（4）酶联免疫吸附测定（ELISA）检测细胞因子白细胞介素（IL）-2、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素γ（IFN-γ）的分泌量；（5）MTT法检测CIK对A549的体外杀伤活性。结果（1）加入hAMSCs提取物的实验组增殖速度明显高于对照组，第12、14、17天CIK细胞数分别为[（5．26±0．01）×105／mL％（5．60±0．00）×105／mL）]、r（6．26士0．23）×105／mL。5．（9．37±0．15）×105／mL]、[（8．10±0．75）×105／mL vs．（11．00土1．67）×105／mL]，差异有统计学意义（P〈0．05）；（2）ELISA结果表明，hAMSCs提取物对早期CIK细胞分泌细胞因子有一定促进能力，两组第14天IL-2、TNF-α、IFN-γ量（pg／mL）分别为（13．49±0．78 vs．15．49±3．47）、（53．52±5．52 vs．33．83±15．61）、（60．68±19．390s．50．24±18．89），差异无统计学意义（P〉0．05）；（3）MTT结果：对照组与实验组IC50分别为（38．60±18．63 vs．25．62±8．39），差异无统计学意义（P〉0．05）。结论成功将热休克hAMSCs提取物与CIK共培养；共培养后显著促进了早期CIK的增殖活性。Objective To improve the proliferation,secretion of cytokines and in vitro killing of CIK cells,and to provide the basis for the study of high quality CIK cells,heat shock hAMSCs extract and CIK cells were co-cultured. Methods （1）Conventional induction culture CIK cells from peripheral blood mononuclear. （2）Processed hAMSCs by heat shock in 42 ℃ water bath for t h, then collected supernate and extracted of hAMSCs after a 48 h incubation in 37 ℃, 5G CO2 ,co-cultured the heat shock hAMSCs＇ extract with CIK cells （in a proportion of 370μg ： 2 ×106）. （3）the CIK ceils number of 12,14,17 d were counted, the growth curv- edrawed. （4）The secretion levels （pg/mL） of IL-2,TNF-α and IFN-γ were tested by ELISA method. （5）The CIK＇s cytolytic activi- ty to A549 cells were tested by MTT assay. Results （1）The experimental group joined the proliferation rate of hAMSCs extract was significantly higher than the control group, control group and experimental group 12,14,17 d of cell were[ （5.26±0.01） ×105/ mLvs. （5.6±0.00）×105/mL],[（6. 26±0. 23） ×105/mL vs. （9. 37±0. 15）×105/mL] and [（8. 10±0.75）×105/mL vs. （11.00 ± 1.67） ×105/mL], respectively（P〈0.05）. （2） The results of ELISA showed that hAMSCs extract on early stage of CIK cells secrete cytokines could promote ability, the secretion levels （pg/mL） of IL-2, TNF-α and IFN-γ were （13. 49± 0. 78 vs. 15.49＋±.47）,（53.52±5.52 vs. 33.83±15.61） and （60. 68±19. 39 vs. 50.24±18.89） ,respectively （P〉0.05）.（3）Theresults of MTT showed that, IC50 in control group and experimental group were 38.60 ± 18.63 and 25.62 ± 8.39, respectively （P〉 0.05）. Conclusion We co-culture the CIK cells with heat-shock hAMSCs＇ extract successfully;and the new method promoted the plication capacity of CIK.

关 键 词：杀伤细胞 人羊膜间充质干细胞 A549肺腺癌细胞 热休克 

分 类 号：R73-36[医药卫生—肿瘤]