独立表达双基因的伪狂犬病毒通用转移载体的构建  

作　　者：黄红亮 何玲 任常宝 谢小雨 佘峥 唐兆新[1,2] 陈瑞爱[1,2] 

机构地区：[1]肇庆大华农生物药品有限公司/农业部动物疫病防控生物技术与制品创制重点实验室,广东肇庆526238 [2]华南农业大学兽医学院,广州510642

出　　处：《黑龙江畜牧兽医》2016年第10期175-177,共3页Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine

基　　金：广东省高新技术工业攻关项目(20130117g);肇庆市科技技术项目(2012C003)

摘　　要：为了构建能同时独立表达双基因的重组伪狂犬病毒通用转移载体,试验采用前期构建的p UC19-g E/HEK为骨架,将设计合成的独立表达双基因的表达盒(p CMV+MCS1+p CMV+MCS2+BGH p A)克隆至其XbaⅠ位点,获得通用转移载体pg E-CMV2,以多克隆位点限制性内切酶单酶切,并将EGFP基因克隆至MCS1的SpeⅠ/PstⅠ位点、DsRed基因克隆至MCS2的KpnⅠ/XhoⅠ位点,转化BHK-21细胞同时观察荧光。结果表明:多克隆位点限制性内切酶单酶切pg E-CMV2呈现单一条带,EGFP和DsRed均呈现目标荧光,且将两种荧光蛋白分别克隆至同一分子的MCS1与MCS2,两种荧光蛋白均能有效表达。说明pg E-CMV2构建正确,且能独立有效表达双基因,可用于实现将两个或多个外源基因一次重组入PRV基因组中,实现"一针多防"。

关 键 词：伪狂犬病毒 双基因 独立表达 通用转移载体 载体构建 表达盒 

分 类 号：S852.659.1[农业科学—基础兽医学]