基于酶联免疫反应的玉米细菌性枯萎病菌快速检测方法  

Rapid Detecion of Pantoea stewartii subsp. Stewartii Using Enzyme-Linked Immunoassay

作　　者：孔德昭[1] 彭娟[1] 刘丽强[1] 唐丽娟[1] 匡华[1] 

机构地区：[1]食品科学与技术国家重点实验室江南大学,江苏无锡214122

出　　处：《食品与生物技术学报》2016年第9期958-962,共5页Journal of Food Science and Biotechnology

基　　金：国家"十二五"科技支撑计划项目(2012BAC01B07)

摘　　要：通过菌体免疫小鼠获得高灵敏的高特异性单克隆抗体，并以此为基础建立一种快速、灵敏的单克隆抗体双抗体夹心法检测玉米细菌性枯萎病菌（Pantoea stewartill subsp.Stewartii）。通过小鼠脾脏融合实验获得3株单克隆抗体（12B4、10B1、11C2），并通过双抗体夹心法筛选配对细胞株，建立双抗体夹心法。最低检测限（LOD）为1.5×10^4 cfu/mL，线性范围在4.57×10^5-1.11×10^8 cfu/mL。该方法对玉米细菌性枯萎病菌具有很好的特异性，对玉米种子添加回收实验回收率为85.6%-90.2%，相对标准偏差低于5.0%。A sensitive and rapid monoclonal antibody-based sandwich enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was established to detect Pantoea stewartill subsp.Stewartii （Fss）. Three murine hybridomas （12B4/10B1/11C2） were obtained from the spleen cells fused produce. A pair of monoclonal antibodies （mAb） was selected for the sandwich ELISA method. The mAb 10B1 was conjugated with horseradish peroxidase （HRP） as the detection antibody and the mAb 11C2 was used as the capture antibody. The limit of detection of this method was 1.5 ×10^4 cfu/mL,and the linear range from 4.57×10^5 to 1.11×10^8 cfu/mL.

关 键 词：玉米细菌性枯萎病菌 单克隆抗体 双抗体夹心法 玉米 

分 类 号：S435.131.4[农业科学—农业昆虫与害虫防治]