枯草芽孢杆菌头孢菌素C脱乙酰基酯酶在大肠杆菌中的诱导及组成型表达  

Inducible and constitutive expression of cephalosporin-C deacetylase from Bacillus subtilis in Escherichia coli

作　　者：朱颖[1] 马晓强[1] 杨胜利[1] 魏东芝[1] 苏二正[1,2] 

机构地区：[1]华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室鲁华生物技术研究所,上海200237 [2]南京林业大学轻工科学与工程学院酶与发酵工程实验室,南京210037

出　　处：《生物加工过程》2017年第2期21-29,共9页Chinese Journal of Bioprocess Engineering

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973计划)(2012CB721003);国家高技术研究发展计划(863计划)(2012AA022206B);中央高校基本科研业务费专项资金;生物反应器工程国家重点实验室开放课题

摘　　要：本研究构建了8种诱导型质粒和16种组成型质粒,试图实现枯草芽孢杆菌头孢菌素C脱乙酰基酯酶(CAH)基因在大肠杆菌中的高效异源表达。经过筛选,最终选择带有pUC19上的起始位点、SIL_3基因、trp启动子以及间隔序列为B1的组成型表达质粒p B1-SIL_3-K为最佳表达质粒。将PB1-SIL_3-K转入Escherichia coli DH5α,重组菌在37℃发酵培养24 h,其OD值达到5.4,酶活达到了138.61 U/mL。进一步通过培养基组成、培养条件、放大过程等优化,在7 L发酵罐上,CAH最高酶活达到1 340 U/mL,为目前国内外文献报道最高水平。In this work,8 inducible plasmids and 16 constitutive plasmids were constructed to fulfil the high-level heterogenous expression of cephalosporin-C deacetylase( CAH) gene in Escherichia coli. A constitutive expression plasmid p B1-SIL_3-K,with a replication origin derived from p UC19 and B1 sequence between the SIL_3 gene and trp promoter,was selected as the most efficient expression plasmid.The OD and CAH activity expressed by E. coli DH5α/p B1-SIL_3-K attained 5. 4 and 138. 61 U/m L when cultivating at 37 ℃ for 24 h.Furthermore,1 340 U/mL of CAH activity was obtained in a 7-L fermenter by optimizing the medium components,culture conditions and scale-up process,which is the highest CAH activity reported to date.

关 键 词：头孢菌素C脱乙酰基酯酶 诱导型表达 组成型表达 3'-脱乙酰基-7-氨基头孢烷酸 

分 类 号：TQ925[轻工技术与工程—发酵工程]