细胞角蛋白19基因的克隆构建与重组表达  

作　　者：房玉珠[1] 朱燕[1] 叶森 姚冬明[1] 

机构地区：[1]江苏大学附属人民医院检验科,江苏镇江212002 [2]南京诺尔曼生物技术有限公司,江苏南京210031

出　　处：《江苏大学学报（医学版）》2017年第1期78-81,共4页Journal of Jiangsu University：Medicine Edition

摘　　要：目的:构建肿瘤标志物细胞角蛋白19(CK19)基因的原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达,以获取低成本、高产量、高纯度的CK19蛋白。方法:根据基因库CK19的基因序列,设计多条用于基因拼接的DNA引物,利用PCR技术扩增CK19基因,用基因重组技术将该片段克隆到质粒p ET28a中,PCR和DNA测序鉴定。将重组质粒CK19-p ET28a转化大肠埃希菌BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,使用镍柱亲和层析纯化蛋白,并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹鉴定。结果:成功扩增出CK19基因片段,克隆到表达载体后经菌落PCR和DNA测序鉴定正确。重组质粒CK19-p ET28a在大肠埃希菌中经诱导和纯化后获得纯度较高目的条带,蛋白质印迹结果证明目的蛋白有反应性。结论:成功构建了肿瘤标志物CK19原核表达载体,经过诱导表达和蛋白纯化获得了高纯度有活性的目的蛋白。

关 键 词：肿瘤标志物 CK19 克隆构建 重组表达 

分 类 号：R730.43[医药卫生—肿瘤]