脂氧素A4干预尿酸诱导人脐静脉内皮细胞发生氧化应激反应的机制研究  

The mechanism of lipoxin A4 intervention on the oxidative stress induced by uric acid in human umbilical vein endothelial cells

作　　者：周游[1] 周京国[2] 易婷婷[3] 郭晓兰[4] 蒋兴亮[3] Zhou You Zhou Jingguo Yi Tingting Guo Xiaolan Jiang Xingliang(Department of Medical Laboratory Medicine, Central Hospital of Suining, Sichuan 629000, Chin)

机构地区：[1]四川省遂宁市中心医院检验科,629000 [2]川北医学院附属医院风湿免疫研究所 [3]川北医学院附属医院检验科 [4]川北医学院转化医学中心

出　　处：《中华风湿病学杂志》2017年第4期252-257,I0001,共7页Chinese Journal of Rheumatology

摘　　要：目的探讨脂氧素A4（LXA4）对尿酸诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）发生氧化应激反应的干预作用，并初步探讨其可能机制。方法以尿酸刺激HUVEC构建氧化应激模型，选择LXA4及二甲苯基碘（DPI）、鱼藤酮对模型进行干预。利用二氯二氢荧光素．乙酰乙酸酯（DCFH—DA）作为荧光探针，测定HUVEC活性氧化物（ROS）生成量；光泽精增强的化学发光法测定HUVEC内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶活性；蛋白质印迹法测定HUVECs内NADPH氧化酶p47phox亚基在胞质、胞膜表达。所有结果均以对照组相对表达量描述，以重复测量方差分析和最小显著性差异检验（LSD）进行统计学分析。结果不同浓度和作用时间尿酸可以刺激HUVEC生成ROS（F=7．286，F=4．532，P均〈0．05），与空白对照组（100±11）比较，80mg/L（177±18）、120mg／L（226±29）、160mg／L（225±16）尿酸组ROS生成量显著升高（t=4．127，t=7．591，t=7．236，P均〈0．05），与基线（100±8）比较，3h（143±16）、6h（140±17）、12h（183±20）、24h（240±29）、48h（160±22）时间点ROS生成量显著升高（t=3．688，t=3．513，t=4．526，t=8．269，t=3．829，P均〈0．05）；不同浓度、不同时间LXA4可以抑制ROS生成（F=4．008，F=4．497，P均〈0．05），与0nmol/L（202±20）比较，10nmol/L（162±16）、100nmol/L（132±15）LXA4可以明显抑制ROS生成（t=3．712，t=4．083，P均〈0．05），与0min（269±39）比较，LXA4预处理15min（160±16）、30rain（158±21）、1h（136±13）、2h（140±13）后ROS生成量显著下降（t=6．373，t=6．426，t=7．125，t=6．981，P均〈0．05）；与尿酸组（252±31）比较，LXA4＋尿酸组（145±29）、DPI＋尿酸组（154±27）ROS生成量显著降低（t=6．356，t=5．853，P均〈0．05），而Rot＋尿酸组（241±32）无明显改变（f=1．027，P〉0．05）；在NADPH氧化酶活性比较�Objective To investigate the effect and mechanism of lipoxin A4 （LXA4） on uric acid （UA） induced oxidative stress of human umbilical vein endothelial cells （HUVECs）. Methods The HUVECs was treated with uric acid to constructing the model of oxidative stress, and intervene the model with LXA4 and xylene based iodine （DP]）, rotenone. Reactive oxygen species （ROS） of HUVEC were detected by a fluorescence probe 2＇, 7＇-dichlorofluorescin diaeetate （DCFH-DA）. The activity of reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate （NADPH） oxidase and p47phox protein was measured by Lucigenin enhanced chemiluminescence and Western blotting among control, uric acid （UA）, LXA4 and UA ±LXA4 groups, respectively. All the results were described by the relative expression of the control group, repeated measure variance analysis and least significant difference test （LSD） were used for statistical analysis. Results UA could stimulate HUVEC to generate ROS with different concentrations and times （F=7.286, F=4.532, P〈0.05）. Compared with the control group（100±11）, the ROS production of group with 80 mg/L UA （177±18）, 120 mg/L （226±29） and 160 mg/L （225±16） increased significantly （t=4.127, t=7.591, t=7.236, P〈0.05）. Compare with baseline（100±8）, the ROS production increased significantly （t=3.688, t=3.513, t=4.526, t=8.269, t=3.829, P〈 0.05） at 3 h（143±16）, 6 h（140±17）, 12 h（183±20）, 24 h（240±29） and 48 h（160±22）. LXA4 could inhibit ROS generation at different concentrations and times （F =4.008, F =4.497, P 〈0.05）. Compared with LXA4 concentration of 0 nmol/L, the LXA4 concentrations of 10 nmol/L （162±16） and 100 nmol/L （132±15） could significantly inhibit ROS generation（t=3.712, t=4.083, P〈0.05）. Compared with pretreatment （269±39）, the ROS generation decreased significantly （t=6.373; t=6.426, t=7.125, t=6.981, P〈0.05） . with LXA4 pretreated for 15 min （160±16）, 30 rain（158±21）, 1 h

关 键 词：脂氧素类 尿酸 脐静脉 内皮细胞 氧化性应激 活性氧 

分 类 号：R363[医药卫生—病理学]