高GC含量基因NADK2的扩增及其真核表达载体的构建  

Amplification of GC-Rich NADK2 Gene and Construction of Its Eukaryotic Expression Vector

作　　者：陈静怡[1] 张泸娇 刘丹慧[1] 

机构地区：[1]温州医科大学检验医学院、生命科学学院,检验医学教育部重点实验室,浙江省医学遗传学重点实验室,温州325035

出　　处：《中国细胞生物学学报》2017年第4期458-462,共5页Chinese Journal of Cell Biology

基　　金：国家自然科学基金青年基金(批准号:81301744)资助的课题~~

摘　　要：在构建线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶(mitochondrial nicotinamide adenine dinucleotide kinase,NADK2)真核表达载体时,该文发现,使用Ex Taq DNA聚合酶扩增无法得到其编码区域全长,5′端缺失一段DNA片段。对其cDNA序列进行分析发现,NADK2编码区GC含量不均衡。起始密码子附近GC含量最高可达92.5%,而3′端终止密码子附近GC含量最低只有27.5%。之后,使用LA Taq及GC缓冲液进行扩增,得到了NADK2基因ORF(open reading frame)全长,并克隆入真核表达载体。该文结果对类似高GC含量DNA片段的PCR扩增有一定的提示作用。The coding region of mitochondrial nicotinamide adenine dinucleotide kinase （NADK2） gene can＇t be amplified with Ex Taq DNA polymerase. The PCR products lacks a fragment in the 5＇ terminal. We find that the GC distribution is highly uneven in the open reading frame （ORF） of NADK2 gene. The GC content is as high as 92.5% at its 5＇ terminal, whereas it is as low as 27.5% at its 3＇ terminal. We then use LA Taq with GC buffer to amplify the target region and get the full length of NADK2 gene ORF. Our results can be informative for researchers cloning similar DNA fragments with high GC content.

关 键 词：NADK2 PCR 高GC含量 LA TAQ 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]