克隆性基因重排检测BIOMED-2系统中内对照体系的改进  

作　　者：杨军[1] 叶庆[1] 张标[1] 

机构地区：[1]南京大学医学院附属鼓楼医院病理科,江苏南京210008

出　　处：《徐州医科大学学报》2017年第6期377-380,共4页Journal of Xuzhou Medical University

基　　金：基金项目：江苏省科技厅重点研发计划社会发展项目（BE2016604）

摘　　要：目的 监测克隆性基因重排各检测管中PCR反应体系的完整性及反应条件的稳定性，避免基因重排的假阴性结果。方法 利用多重PCR方法，检测免疫球蛋白（Ig）中IgH-FR1、IgH-FR2、IgH-FR3、IgK-VJ、IgK-V/i克隆性基因重排和T细胞受体（TCR）中TCRβ-VJ1、TCRβ-VJ2、TCRβ-DJ、TCRγ-VJ1和TCRγ-VJ2克隆性基因重排。①选择GC100和GC300作为管内对照，在各反应管中加入适当的内对照引物，浓度分别为0.625 μmol/L、1.25 μmol/L、2.5 μmol/L、5 μmol/L和10 μmol/L，PCR扩增后行聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），分析结果。②根据①的实验结果，在各反应管中加入最适浓度内对照，以制备好的突变浓度为20%、10%、7.5%、5%、2.5%的基因重排样本为模板，PCR扩增后行PAGE，分析结果。结果 克隆性重排检测引物工作液浓度均为10 μmol/L；检测IgH-FR1、IgH-FR2、IgK-VJ、IgK-V/i、TCRβ-VJ1、TCRβ-VJ2、TCRβ-DJ和TCRγ-VJ1各管中，加入管内对照基因的扩增片段大小均为100 bp，引物浓度均为5 μmol/L；检测IgH-FR3管中，管内对照基因的扩增片段大小为300 bp，引物浓度为5 μmol/L；检测TCRγ-VJ2管中，管内对照基因的扩增片段大小为300 bp，引物浓度为1.25 μmol/L。改进后体系检测敏感度在2.5%～5.0%之间。结论 在BIOMED-2系统中增加合适的管内对照，能够监测每个检测管中PCR反应体系的完整性及反应条件的稳定性。

关 键 词：基因重排 聚丙烯酰胺凝胶电泳 假阴性 内对照 

分 类 号：R773.1[医药卫生—眼科]