葫芦二烯醇的异源高效合成研究  

Study of heterologous efficient synthesis of cucurbitadienol

作　　者：李守连 王冬[2,3] 刘怡[2,3] 林庭庭[4] 唐金磊 花尔并 张学礼[2,3] 戴住波[2,3] 黄璐琦[4] 

机构地区：[1]天津科技大学生物工程学院,天津310018 [2]中国科学院天津工业生物技术研究所,天津300308 [3]中国科学院系统微生物工程重点实验室,天津300308 [4]中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地,北京100700

出　　处：《中国中药杂志》2017年第17期3326-3331,共6页China Journal of Chinese Materia Medica

基　　金：国家高技术研究发展计划(863)项目(2012AA02A704);中国科学院青年创新促进会项目(2015138)

摘　　要：葫芦二烯醇具有抑制炎症和抗癌活性,同时为罗汉果甜苷和葫芦素等重要中药有效成分生物合成途径中的基本前体。为获得高效生产葫芦二烯醇的酿酒酵母细胞工厂,该研究首先从罗汉果中克隆到葫芦二烯醇合酶(CBS)基因,通过在三萜化合物底盘菌WD-2091中异源表达和发酵后,产物经过GC-MS鉴定获得产量为27.44 mg·L^(-1)工程菌。再进一步调控工程菌中葫芦二烯醇合酶基因表达,最终成功获得葫芦二烯醇提高202.07%,产量为82.89 mg·L^(-1),高密度发酵达到1 724.10 mg·L^(-1)的酿酒酵母细胞工厂313-SL-CB。该研究为推动葫芦烷型四环三萜生物合成途径解析及高效细胞工厂创建提供了基础。Cucurbitadienol has anti-inflammation,anti-cancer activities,and acts as a precursor of traditional Chinese medicine active ingredients mogroside and cucurbitacine. For construction of a Sacchromyces cerevisiae cell factory for production of cucurbitadienol,we firstly cloned a cucurbitadienol synthase（ CBS） gene from Siraitia grosvenorii. Then,through heterologous expression of CBS in the triterpenoid chassis strain WD-2091,the engineered strain could produced 27. 44 mg·L^（-1）cucurbitadienol,which was determined by GC-MS. Further regulation of CBS expression led to cucurbitadienol＇s titer increasing by 202. 07% and reaching 82. 89 mg·L^（-1）in the shake flask fermentation and 1 724. 10 mg·L^（-1）in the high cell density fermentation. Our research promotes the cucurbitane-type tetracyclic triterpenoids synthesis pathway analysis progress and provides the basis for further obtaining cell factories for production of cucurbitadienol tetracyclic triterpenoids.

关 键 词：三萜 葫芦二烯醇 合成生物学 酿酒酵母 

分 类 号：Q946[生物学—植物学]