动力相关蛋白1介导的自噬对胃癌MKN-45细胞奥沙利铂敏感性的影响  

DRPl-mediated overactive mitophagy increases the sensitivity of gastric cancer cell MKN- 45 to oxaliplatin

作　　者：徐晓武 杨小敏 胡经纬[3] 郑志强[3] 李德春[1] 

机构地区：[1]苏州大学附属第一医院普通外科,江苏省215000 [2]温州市人民医院病理科 [3]温州医科大学附属第二医院普通外科

出　　处：《中华普通外科杂志》2017年第9期774-777,共4页Chinese Journal of General Surgery

基　　金：浙江省卫生科技计划资助项目（2017191494）

摘　　要：目的探讨动力相关蛋白I（dynamin—related protein1，DRPI）基因沉默对人胃癌细胞株MKN-45奥沙利铂敏感性的影响及其可能的机制。方法构建靶向DRP1基因的短发夹状RNA（shRNA）慢病毒载体，转染至293T细胞，再感染MKN-45细胞，用qRT—PCR鉴定沉默效率。用终浓度为0．5、1．0、2．0、4．0、8．0、16．0及32．0μg／ml的奥沙利铂分别处理实验组、阴性对照组（NC组）和空白对照组（CON组），48h后采用MTT实验检测细胞存活率并计算半数抑制浓度（IC50），流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot检测LC3-Ⅱ和p62表达。结果实验组的DRP1mRNA（0．087±0．025）显著低于NC组（1．040±0．020）和CON组（1．027±0．021）（均P〈0．001）。随奥沙利铂浓度增加，实验组的细胞存活率明显降低（均P〈0．001）。实验组的IC50值（14．1±0．4）μg/ml较NC组（20．0±1．1）μg／ml和CON组（20．0±1．8）μg／ml降低（均P〈0．01）；实验组的细胞凋亡率（9．4％±1．1％）较NC组（6．4％±0．8％）和CON组（6．5％±1．0％）升高（均P〈0．05）；实验组的LC3，Ⅱ（0．36±0．03）较NC组（0．62±0．04）和CON组（0．59±0．07）降低（均P〈0．01）；实验组的P62（0．58±0．04）较NC组（0．39±0．04）和CON组（0．36±0．04）升高（均P〈0．01）。结论DRP1介导的线粒体自嗾提高了MKN-45细胞对奥沙利铂的敏感件．Objective To investigate the effects of DRP1 gene silencing on the chemosensitivity of human gastric cancer MKN-45 ceils to oxaliplatin. Methods A lentiviral vector containing short hairpin RNA （shRNA） targeting DRP1 was constructed and cotransfected to MKN-45 cells. Levels of DRPlmRNA was detected by quantitative RT-PCR, With a final concentration of 0. 5, 1.0, 2. 0, 4.0, 8.0, 16.0 and 32. 0 μg/ml of oxaliplatin processing Lv-shRNA-DRP1 group （ experimental group）, negative control group （NC group）, and blank control group （CON group） respectively. Cellular proliferation was determined by MTT assay and calculate half maximal inhibitory concentration （ IC50 ）. Celluar apoptosis was analyzed by flowcytometry. Using Western blot to detect LC3-Ⅱ and p62 expression. Results DRPlmRNA levels in experimental group （ 0. 087 ± 0. 025 ） was significantly inhibited as compared with NC group （ 1. 040 ± 0. 020） and CON group （ 1. 027 ±0. 021 ） （P 〈0. 001 ）. Cellular survival rate decreased in a oxaliplatin dose-dependent manner （ all P 〈 0. 001 ）. IC50 value in experimental group （ 14. 1 ± 0.4 ） μg/ml dropped compared with NC group （ 20. 0 ±1.1 ） μg/ml and CON group （ 20. 0 ± 1.8 ） μg/ml （ both P 〈 0. 01 ）. Celluar apoptosis rates in experimental group （9.4%± 1.1% ） elevated in contrast with NC group （6. 4% ±0. 8% ） and CON group （6. 5% ± 1.0% ） （both P 〈0. 05）, expression of LC3 in experimental group（0. 36 ±0. 03 ） dropped compared with NC group （ 0. 62 ± 0. 04 ） and CON group （ 0. 59 ± 0.07 ） （ both P 〈 0. 05 ）, expression of P62 in experimental group （ 0. 58 ±0. 04 ） increased in contrast with NC group （0. 39 ± 0. 04） and CON group （0. 36 ± 0. 04） （ both P 〈 0. 05 ）. Conclusions DRPl-mediated overactive mitophagy plays a vital role in increasing the sensitivity of gastric cancer cell MKN- 45 to oxaliplatin.

关 键 词：胃肿瘤 动力蛋白质I 自噬 奥沙利铂 

分 类 号：R735.2[医药卫生—肿瘤]