高钙状态对人晶状体上皮细胞株SRA01/04氧化应激水平的影响  

Effects of calcium elevation on intracellular oxidative stress in human lens epithelial cells SRA01/04

作　　者：陈曦[1] 韩子豪 李舒凝 李松蔓 李艳玮 梁皓[1] 

机构地区：[1]广西医科大学第一附属医院眼科,广西壮族自治区南宁市530021

出　　处：《眼科新进展》2017年第10期906-910,共5页Recent Advances in Ophthalmology

基　　金：国家自然科学基金资助(编号:81360146)~~

摘　　要：目的探讨高钙培养对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)株SRA01/04氧化应激水平的影响。方法选取处于对数生长期的HLEC均匀接种96孔板(每孔2×10~3个细胞),对照组:正常培养的HLEC,实验组:正常培养的HLEC+CaCl_2(3 mmol·L^(-1)、5 mmol·L^(-1)、7 mmol·L^(-1)、9 mmol·L^(-1)、11 mmol·L^(-1)、13 mmol·L^(-1)、15 mmol·L^(-1)、17 mmol·L^(-1)、19 mmol·L^(-1))培养0 h、12 h、24 h、36 h,采用CCK-8法检测各组细胞存活率。利用定量检测试剂盒测量细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、总谷胱甘肽(total-glutathione,T-GSH)含量及氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)/T-GSH比值的变化。结果 3 mmol·L^(-1)、5 mmol·L^(-1)、7 mmol·L^(-1)CaCl_2处理SRA01/04细胞24 h,细胞存活率随CaCl_2浓度增高先呈显著下降趋势,当浓度增高到9 mmol·L^(-1)后细胞存活率又逐渐恢复,各实验组HLEC活力差异有统计学意义(P<0.05)。对照组细胞活力(0.592±0.055)与15 mmol·L^(-1)CaCl_2组(0.293±0.020)细胞活力相比差异有统计学意义(t=7.811,P<0.05)。CaCl_2引起HLEC凋亡的最合适浓度和作用时间为15 mmol·L^(-1)处理24 h。与对照组相比,15 mmol·L^(-1)CaCl_2处理24 h后,细胞核碎裂、溶解,细胞内SOD活力增高(t=-6.417,P<0.05),T-GSH含量下降(t=13.816,P<0.05),GSSG/T-GSH比值增高(t=-4.396,P<0.05)。结论 CaCl_2诱导的高钙状态抑制HLEC的活力,引起细胞内SOD活力和GSSG含量增加,诱发并加剧细胞内氧化应激反应。Objective To investigate the influence of calcium elevation on oxida- tive stress in human lens epithelial cells （HLEC） SRA01/04. Methods The cells （2 x 10^8 cens/well） which in the period of logarithmic phase were seeded into 96-well plates with three replicates for the two groups;and in the experimental group, SRA01/04 cells were exposed to a CaC12 concentration gradient （3 nunol · L-1 ,5 mmol · L-1,7 mmol · L-1 ,9 mmol · L-1, 11 mmol · L-1, 13 mmol· L-1, 15 minol · L-1, 17 mmol · L-1, 19 mmol· L-1 ） for 0 h,12 h,24 h,36 h;while the cells in the control group were cultured in complete 1640 medium. Cell counting kit-8 （CCK-8） assay was used to measure cell viability. The levels of intracellular superoxide dismutase （ SOD ）, glutathione （ GSH ） content and oxidized glutathione （GSSG） / total glutathione （T-GSH） were determined by using the microplate-reader method with the commercial total/oxidized glutathione and sod quantification kit. Results At fLrst,the survival rate of SRA01/04 ceUs treated with 3 mmol · L-1 ,5 mmol · L-· ,7 mmol · L-1 CaC12 for 24 h showed a significant de- crease with the increase of CaC12 concentration by CCK-8 assays, but gradually in- creased when the concentration increased to 9 mmol · L-1, and the difference ap- proached statistical significance （P 〈 0.05 ）. Meanwhile, there was significant difference in the viability of the control group （0.592 ± 0.055 ） and cells exposed to 15 mmol · L - CaC12 （0.293 ± 0.02 ） （ t = 7.811 ,P 〈 0.05 ）. Cell treatment with 15 mmol · L-1 CaCl： for 24 h was the most appropriate condition for HLEC apoptosis, followed by the appear- ance of nuclear fragmentation and dissolution, enhanced intracellular SOD viability （ t = - 6.417 ,P 〈 0.05 ）, decreased T-GSH content（ t = 13. 816 ,P 〈 0.05 ）, and increased ratio of GSSG/T-GSH （ t = - 4.396 ,P 〈 0.05 ） when compared with the control group, and the differences were statistically significant. Conclusion Intracellular calc

关 键 词：高钙 人晶状体上皮细胞 细胞活力 谷胱甘肽 超氧化物歧化酶 

分 类 号：R776[医药卫生—眼科]