α3 nAChRs亚基基因中定点氨基酸的突变研究  

Site-directed Mutagenesis of α3 nAChRs Subunit

作　　者：雷宇苗 朱晓鹏[1,2] 凌小惠 张璐[1,2] 长孙东亭 罗素兰[1,2] Lei Yumiao Zhu Xiaopeng Ling Xiaohui Zhang Lu Zhangsun Dongting Luo Sulan(Key Laboratory of Tropical Biological Resources of Ministry of Education, Key Laboratory for Marine Drug of I-Iaikou, Hainan University, Haikou 570228, China The Ocean College, Hainan University, Haikou 570228, China)

机构地区：[1]海南大学热带生物资源教育部重点实验室/海口市海洋药物重点实验室,海南海口570228 [2]海南大学海洋学院,海南海口570228

出　　处：《海南大学学报（自然科学版）》2017年第3期268-272,共5页Natural Science Journal of Hainan University

基　　金：国家自然科学基金(81420108028);长江学者和创新团队发展计划(IRT_15R15);海南省普通高等学校研究生创新科研课题(Hys 2016-15);海南省高等学校科学研究资助项目(Hnky2017-16)

摘　　要：为了利用重叠延伸PCR技术对α3亚基中指定的氨基酸进行定点突变,以便为今后深入研究烟碱型乙酰胆碱受体(Nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)中关键氨基酸的功能及与药物作用的分子机制奠定基础,本研究以α3 nAChRs亚基基因作为模板,利用重叠延伸PCR技术对α3亚基中指定的氨基酸进行了定点突变,突变后的基因片段被连接到pMDTM18-T载体上,并通过基因测序来验证突变的正确性.结果表明:通过重叠延伸PCR法已将α3 nAChR N端第174位的丙氨酸(Alanine,Ala,A)成功突变为谷氨酸(Glutamic acid,Glu,E).由此认为:重叠延伸PCR法成功实现了α3 nAChRs亚基基因中定点氨基酸的突变,该方法可为更多受体突变型的建立提供借鉴,也可为研究nAChRs中关键氨基酸的功能以及药物与nAChRs相互作用的分子机制奠定基础.In order to lay a foundation for the further functional study of the key amino acids of α3 nAChR, in the study, α3 nAChRs subunit gene was usd as the template, and overlap extension PCR technique was used for point mutation of α3 nAChRs. Then, the mutant was cloned into pMDTM18-T for sequencing. The sequencing results indicated that α3 nAChR＇ s 174th Ala is mutated to Glu successfully.

关 键 词：烟碱型乙酰胆碱受体 定点突变 重叠延伸PCR 

分 类 号：R93[医药卫生—生药学]